棉花曲叶病毒快速检测

检测项目

病毒基因组DNA-A全序列分析、AC1基因片段扩增、AV1外壳蛋白检测、β卫星DNA鉴定、病毒粒子形态观察、寄主范围测定、烟粉虱传毒能力测试、病毒载量定量分析、抗性基因筛选、症状分级评估、交叉保护试验、核酸杂交特异性验证、血清学反应效价测定、分子标记开发、环境耐受性研究、传播途径验证、重组变异监测、沉默抑制子功能验证、寄主防御响应分析、病毒-媒介互作研究、抗病毒药剂筛选、田间流行规律调查、种子带毒率检测、土壤残留监测、农器具污染筛查、转基因抗性评价、温度敏感性试验、光照影响研究、湿度关联分析、复合侵染鉴别

检测范围

棉花幼苗叶片样本、成熟期茎秆样本、花蕾组织样本、棉铃表皮样本、根系分泌物样本、烟粉虱成虫虫体样本、烟粉虱若虫虫体样本、温室栽培基质样本、大田土壤样本、灌溉水样样本、农用器械表面拭子样本、种子表皮样本组培苗离体材料样本病株相邻健康植株样本野生棉种质资源样本番茄叶片对照样本辣椒茎秆对照样本南瓜花器样本木槿属植物样本锦葵科近缘种样本苘麻属植物样本昆虫人工饲料残留物样本实验室保存毒源样本阳性对照质粒样本阴性对照健康植株样本病叶浸出液浓缩样本地膜覆盖残留物样本农药混配溶液样本转基因棉花品系样本

检测方法

1.PCR检测法：通过设计特异性引物扩增病毒保守区域（如AC1基因），采用TaqDNA聚合酶进行热循环反应，琼脂糖凝胶电泳验证产物大小

2.实时荧光定量PCR：使用SYBRGreen或TaqMan探针技术对病毒DNA进行绝对定量分析，建立标准曲线计算拷贝数

3.ELISA检测：采用双抗体夹心法测定病毒外壳蛋白浓度，包被多克隆抗体后通过酶标仪读取OD450值

4.核酸斑点杂交：将待测核酸固定于尼龙膜后与地高辛标记探针杂交，化学发光法显影判定阳性信号

5.电镜观察：负染法制备样品后使用透射电子显微镜观察特征性双联体病毒粒子形态

6.生物测定法：通过烟粉虱人工接种健康棉苗，观察典型曲叶症状发展进程

检测标准

GB/T28068-2011棉花曲叶病毒检疫鉴定方法
SN/T2127-2015进出境棉花种传病毒检测规程
NY/T3179-2018棉花抗病性鉴定技术规范
ISO17075:2017植物病毒分子检测通用要求
GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程真实性鉴定
SN/T1840-2016植物病毒检疫处理规范
NY/T401-2000脱毒棉种生产技术规程
GB/T36834-2018媒介昆虫传毒能力测定方法
ISO16140-3:2021分子生物学方法验证协议
GB/T28630.2-2012白粉虱检疫鉴定方法

检测仪器

PCR扩增仪：用于DNA模板的指数级扩增，控温精度0.1℃

荧光定量PCR系统：配备多通道光学模块实现实时监测扩增曲线

酶标分析仪：96孔板高通量读取ELISA反应吸光度值

核酸提取工作站：磁珠法自动完成植物组织核酸纯化流程

电泳成像系统：紫外透射仪配合CCD相机记录凝胶电泳结果

超速离心机：最大转速150000g用于病毒粒子富集纯化

生物安全柜：提供P2级防护的核酸操作实验环境

透射电子显微镜：加速电压80-120kV观察病毒超微结构

人工气候培养箱：精确控制温度(0.5℃)/湿度(3%)/光照强度(10%)

昆虫饲养装置：恒温(261℃)条件下维持烟粉虱实验种群

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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