RNA干扰效果评估实验

检测项目

基因表达水平定量分析：通过实时荧光定量PCR技术检测靶基因mRNA的相对表达量变化，评估RNAi对转录水平的抑制效率。

蛋白质印迹分析：利用特异性抗体检测靶蛋白的表达水平，从翻译层面验证RNA干扰是否成功下调目标蛋白。

细胞活力检测：采用CCK-8或MTT法等测定干扰处理后细胞的增殖活性，评估基因沉默对细胞生长的影响。

细胞凋亡率检测：通过流式细胞术结合Annexin V/PI双染法，分析RNAi诱导的细胞程序性死亡比例。

细胞周期分布分析：利用流式细胞术检测PI染色后的细胞DNA含量，判断基因沉默对细胞周期进程的扰动。

慢病毒载体滴度测定：对用于递送shRNA的慢病毒载体进行功能性滴度检测，确保转染效率的一致性。

脱靶效应评估：通过全转录组测序或特定信号通路因子检测，分析RNAi序列可能产生的非特异性基因调控。

干扰效率的时间动力学监测：在不同时间点采集样本，追踪RNAi效果随时间变化的动态过程。

半抑制浓度测定：通过设置不同浓度的siRNA进行处理，计算使基因表达降低50%所需的半数抑制浓度。

细胞迁移与侵袭能力检测采用Transwell小室实验评估目标基因沉默后对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。

荧光素酶报告基因检测：将靶基因3‘UTR区域克隆至报告载体，通过检测荧光素酶活性验证miRNA或siRNA的直接作用。

检测范围

肿瘤细胞系研究：适用于HeLa、A549、MCF-7等多种人类肿瘤细胞系中癌基因或抑癌基因的功能缺失研究。

原代细胞培养物：针对从组织中直接分离培养的原代细胞进行基因功能探索，更接近体内生理环境。

动物模型组织样本：从小鼠、大鼠等实验动物的特定器官或肿瘤组织中提取RNA和蛋白，评估体内干扰效果。

植物基因功能研究：应用于拟南芥、水稻等模式植物，研究生长发育相关基因的沉默效应。

病毒基因功能研究：针对HIV、HCV等病毒的必需基因设计siRNA，评估其对病毒复制能力的抑制。

干细胞定向分化调控：在胚胎干细胞或诱导多能干细胞中沉默特定因子，研究其对分化路径的影响。

神经退行性疾病模型：在帕金森病、阿尔茨海默病等细胞或动物模型中敲低致病蛋白表达进行病理机制研究。

药物靶点验证：通过RNAi技术敲低潜在药物靶点基因，观察表型变化以确认靶点的治疗价值。

信号通路关键节点分析：特异性沉默信号转导通路中的激酶或转录因子，阐明通路上下游关系。

转基因生物构建验证：对构建的转基因动植物模型进行基因沉默效率检测，确保模型的有效性。

检测标准

ISO 20391-2:2019： Biotechnology - Cell counting - Part 2: Experimental design and statistical analysis to quantify counting method performance.

GB/T 37872-2019： 核酸靶标定量测定参考程序 实时荧光PCR法。

GB/T 34796-2017： 溶液中核酸浓度的定量测定 紫外分光光度法。

ISO 10993-5:2009： Biological evaluation of medical devices - Part 5: Tests for in vitro cytotoxicity.

GB/T 16886.5-2017： 医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验。

The MIQE guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments.

ISO 17025:2017: General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

检测仪器

实时荧光定量PCR仪: 该仪器通过监测PCR反应过程中荧光信号的积累实现对起始模板的绝对或相对定量，用于精确测量干扰后靶基因mRNA的表达变化。

流式细胞仪: 利用激光激发荧光标记的细胞或微球，快速分析上万单个细胞的多种参数，用于检测细胞凋亡、周期分布及表面标志物表达。

酶标仪: 一种基于光吸收、荧光或化学发光原理对微孔板样品进行高通量检测的设备，用于进行细胞活力、报告基因活性等生化 assays。

蛋白印迹成像系统: 通过CCD相机或激光扫描仪捕获化学发光或荧光信号，对 Western Blot 膜上的特异蛋白条带进行定性和半定量分析。

超微量分光光度计: 使用微量样品即可快速测定核酸或蛋白质的浓度和纯度，确保用于后续实验的样品质量符合要求。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

合作客户展示

部分资质展示