RNA干扰效率荧光检测

发布时间：2026-01-04

RNA干扰效率荧光检测是通过荧光标记和信号分析定量评估siRNA或shRNA沉默靶基因效果的技术。该检测的核心在于设计特异性探针、选择灵敏的荧光报告系统，并精确测量荧光强度变化以计算基因表达抑制率。操作需严格控制转染效率、细胞状态和荧光淬灭等因素。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

荧光素酶报告基因活性测定：将靶基因序列与荧光素酶基因构建成报告质粒，通过检测荧光素酶活性变化反映RNAi对靶基因的抑制效果。

细胞内mRNA水平定量分析：利用荧光定量PCR技术，通过特异性探针检测干扰后细胞内靶基因mRNA的残留量，计算沉默效率。

绿色荧光蛋白表达抑制率检测：以GFP作为报告基因，通过流式细胞术或荧光显微镜观察GFP荧光强度减弱程度评估RNAi效率。

siRNA转染效率验证：使用带有荧光标记的阴性对照siRNA转染细胞，通过流式细胞仪分析荧光阳性细胞比例确认转染成功率。

双荧光素酶比值测定：同时使用海肾萤光素酶和萤火虫萤光素酶作为内外参比，通过双报告系统校正转染差异对实验结果的影响。

细胞凋亡相关基因沉默效果评估：针对促凋亡或抗凋亡基因设计siRNA，通过检测 Caspase 活性等荧光指标分析功能型基因的干扰效果。

信号通路关键因子表达检测：对特定信号转导通路中的关键蛋白进行RNAi，采用免疫荧光法观察下游磷酸化蛋白的荧光信号变化。

病毒载体介导的shRNA效率测试：利用携带shRNA和荧光标记的慢病毒或腺病毒感染细胞，通过追踪荧光表达评估稳定干扰株系的建立效果。

高通量筛选平台的干扰效率验证：在96孔或384孔板中进行大规模siRNA转换后使用微孔板读数器批量检测各孔发光值进行初筛。

三维细胞模型中基因沉默深度分析: 在类器官或多细胞球状体模型中应用 RNAi 技术并通过共聚焦显微镜分层扫描获取三维空间内的干扰效率数据。

肿瘤细胞系中的癌基因沉默研究: 适用于 HeLa、A549、MCF-7 等常见癌细胞系针对 MYC、KRAS、EGFR 等癌基因的功能性验证实验。

干细胞多能性维持相关因子筛选: 用于胚胎干细胞或诱导多能干细胞中对 OCT4、SOX2、NANOG 等多能性因子的调控机制研究。

神经退行性疾病模型构建验证: 应用于帕金森病或阿尔茨海默症细胞模型中对 α-突触核蛋白或 Tau 蛋白编码基因的靶向干预测试。

植物病原菌抗性基因功能分析: 在拟南芥水稻等模式植物中通过 VIGS 技术结合 GFP 标记研究抗病相关通路的分子机制。

昆虫特定生长发育调控实验: 针对果蝇家蚕等模式昆虫的蜕皮激素或保幼激素受体基因为靶点进行 RNAi 表型与分子水平双重验证。

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。