肝微粒体稳定性测试

检测项目

固有清除率测定：评估化合物在肝微粒体孵育体系中被代谢酶消除的固有速率，是预测体内肝清除的关键参数。

半衰期计算：通过化合物浓度随时间下降的曲线，计算其在肝微粒体中的代谢半衰期，直观反映代谢稳定性。

代谢产物鉴定：利用高分辨质谱等技术，分析并鉴定化合物经肝微粒体代谢后生成的主要代谢产物结构。

酶动力学参数测定：研究代谢反应的米氏动力学，获得最大反应速率和米氏常数等关键参数。

CYP450酶亚型贡献度评估：通过使用特异性化学抑制剂或重组单酶，确定负责代谢的主要CYP450酶亚型及其贡献比例。

NADPH依赖性测试：验证化合物的代谢是否依赖于辅因子NADPH，以确认是否为典型的I相酶促代谢反应。

时间依赖性抑制筛选：检测化合物与CYP450酶预孵育后是否导致酶活性不可逆或准不可逆下降，评估其时间依赖性抑制潜力。

固有清除率种属差异比较：平行测试化合物在不同种属肝微粒体中的代谢稳定性，为临床前种属选择提供依据。

血浆蛋白结合影响评估：考察血浆蛋白存在下对肝微粒体固有清除率的影响，更准确地预测体内情况。

代谢表型研究：综合运用化学抑制、抗体抑制及重组酶技术，全面阐明参与代谢的酶系及其贡献。

检测范围

新化学实体候选药物：在药物发现与开发早期，对大量候选化合物进行快速代谢稳定性排序和筛选。

前药设计与评价：评估前药在肝微粒体中转化为活性药物的速率和程度，优化前药设计。

天然产物活性成分：研究中药或天然产物中单一活性成分的代谢特征，阐明其体内过程。

农药与化学品：评估农药、工业化学品等外源性物质在生物体内的代谢转化与解毒途径。

药物相互作用研究：作为体外模型，初步评估新药是否为CYP450酶的底物、抑制剂或诱导剂。

手性药物对映体：分别研究手性药物不同对映体在肝微粒体中的代谢差异，即立体选择性代谢。

代谢软点分析：通过鉴定不稳定的代谢位点，指导化学家对先导化合物进行结构修饰以提高代谢稳定性。

种属外推与缩放：基于不同实验动物肝微粒体数据，通过数学模型外推预测人体内的肝清除率。

制剂处方筛选：评估不同制剂处方是否会影响原料药的代谢稳定性，为处方开发提供参考。

法规申报支持：生成符合药品监管机构要求的体外代谢研究数据，支持临床试验申请和新药上市申报。

检测方法

底物 depletion 法：最常用方法，通过监测孵育体系中母药浓度随时间减少的速率来计算固有清除率。

代谢产物生成法：通过定量检测特定代谢产物的生成速率来评估代谢活性，适用于有明确代谢途径的化合物。

LC-MS/MS 定量分析：采用液相色谱-串联质谱技术对孵育样品中的母药或代谢产物进行高灵敏度、高选择性的定量分析。

高通量自动化孵育：利用液体处理工作站实现从加样、孵育到终止反应的全流程自动化，大幅提升筛选效率。

Cocktail 探针底物法：将多种CYP450酶的特异性探针底物混合孵育，一次性评价化合物对多个CYP亚型的抑制潜力。

UPLC-QTOF/MS 高分辨分析：采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱进行非靶向扫描，用于未知代谢产物的鉴定与结构解析。

放射性标记示踪法：使用放射性同位素标记的化合物进行孵育，通过放射性检测追踪代谢物的分布与生成。

荧光及发光检测法：使用可产生荧光或化学发光信号的特定底物，快速检测CYP450酶的活性变化。

固相萃取前处理：在仪器分析前，采用固相萃取技术对孵育样品进行净化和富集，以提高检测灵敏度。

数据分析与模型拟合：应用专业软件对浓度-时间数据进行非线性回归拟合，计算半衰期、固有清除率等动力学参数。

检测仪器设备

恒温振荡孵育器：提供稳定且均匀的37℃恒温环境，并带有振荡功能以确保孵育体系充分混合。

液相色谱-串联质谱仪：核心分析设备，用于对孵育样品中的药物及其代谢物进行高灵敏度的分离与定量检测。

高速冷冻离心机：用于终止反应后快速离心沉淀蛋白，获取澄清的上清液供后续分析。

液体处理工作站：自动化移液平台，可实现微升级别的精准、快速加样和分液，适用于高通量筛选。

超高效液相色谱仪：配备亚2微米颗粒色谱柱，实现代谢样品的高速、高分离度分析。

高分辨质谱仪：如Q-TOF或Orbitrap，用于精确测定代谢产物的分子量并进行结构推测。

氮气吹干浓缩仪：利用温和的氮气流将样品溶液快速吹干浓缩，以进行溶剂置换或提高待测物浓度。

pH计：精确测定和调节孵育缓冲液的pH值，确保反应在生理pH条件下进行。

-80℃超低温冰箱：用于长期保存肝微粒体、辅因子溶液及待测化合物储备液，以保持其生物活性与稳定性。

数据分析工作站：安装有质谱数据处理软件及动力学分析软件的高性能计算机，用于处理海量实验数据并生成报告。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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