亲和色谱纯化测试

检测项目

目标蛋白纯度：评估经亲和色谱纯化后，目标蛋白在总蛋白中的百分比，是衡量纯化效果的核心指标。

配体结合容量：测定单位体积亲和介质能够特异性结合的目标蛋白的最大量，反映介质的载量性能。

非特异性吸附：检测杂质蛋白与亲和介质或载体骨架的非目的性结合程度，评估介质的选择性。

洗脱效率：衡量在特定洗脱条件下，从介质上解离并回收的目标蛋白占结合总量的比例。

蛋白回收率：计算整个纯化流程后，回收到的具有活性的目标蛋白占初始样品中目标蛋白总量的百分比。

介质稳定性：测试亲和介质在多次使用、极端pH或化学试剂作用后，其结合容量和性能的保持能力。

洗脱峰均一性：通过分析洗脱峰的峰形和宽度，判断目标蛋白是否被集中洗脱，反映洗脱条件的优化程度。

内毒素残留：检测纯化后样品中细菌内毒素的含量，是生物制药领域关键的安全性指标。

宿主细胞蛋白残留：定量分析纯化产物中来自表达系统（如CHO、E.coli）的宿主蛋白杂质。

DNA残留：测定纯化后样品中残留的宿主细胞DNA含量，是生物制品工艺验证的重要项目。

检测范围

重组抗体：如单克隆抗体、抗体片段（Fab， scFv）等，利用Protein A/G/L等配体进行纯化。

融合标签蛋白：带有His-tag、GST-tag、MBP-tag等的重组蛋白，使用相应的金属螯合或标签配体介质。

酶及其抑制剂：利用底物、辅因子或抑制剂作为配体，纯化特定的酶类或与其相互作用的分子。

激素与受体：纯化胰岛素、生长激素等及其对应的膜受体或可溶性受体片段。

抗原与抗原表位：使用固定化抗体纯化特定抗原，或利用抗原纯化特异性抗体。

核酸结合蛋白：以DNA或RNA序列作为配体，纯化转录因子、核糖核蛋白等。

糖蛋白与凝集素：使用凝集素（如Con A）纯化特定糖基化模式的糖蛋白。

免疫复合物：用于分离和纯化抗原-抗体复合物，研究免疫相互作用。

病毒与病毒载体：利用针对病毒表面蛋白的抗体或受体进行纯化，用于疫苗和基因治疗。

细胞膜蛋白：通过其特异性配体或抗体，从去垢剂溶解的膜组分中纯化膜蛋白。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：最常用的定性分析纯度与分子量的方法，通过染色评估纯度。

高效液相色谱（HPLC）：包括尺寸排阻色谱、反相色谱等，用于精确分析蛋白纯度与聚合状态。

紫外-可见分光光度法：通过测量280nm等波长处的吸光度，快速定量蛋白浓度并初步判断纯度。

酶联免疫吸附测定（ELISA）：高灵敏度地定量检测特定杂质（如宿主细胞蛋白）或目标蛋白含量。

毛细管电泳（CE）：提供高分辨率的纯度分析，尤其适用于抗体电荷异质体的检测。

质谱分析（MS）：用于精确分子量测定、序列确认以及翻译后修饰和微小杂质的鉴定。

表面等离子共振（SPR）：实时、无标记地测定目标蛋白与固定配体的结合动力学和亲和力。

动态光散射（DLS）：检测样品中蛋白质的流体力学半径和粒径分布，评估聚集情况。

浊度测定法：快速评估样品澄清度，间接反映高分子量聚集物或不溶物的存在。

鲎试剂法（LAL）：标准且灵敏的方法，用于定量检测样品中的内毒素含量。

检测仪器设备

ÄKTA蛋白纯化系统：全自动层析系统，用于方法开发、优化及规模化亲和色谱纯化过程。

高效液相色谱仪（HPLC）：配备紫外、荧光等检测器，用于高精度分析样品纯度与成分。

紫外-可见分光光度计：用于快速测量蛋白质溶液在特定波长下的吸光值以计算浓度。

SDS-PAGE电泳系统：包括电泳槽、电源和凝胶成像系统，用于蛋白质分离与纯度初步分析。

酶标仪：用于进行ELISA、蛋白定量（BCA/Bradford）等微孔板检测的读数设备。

质谱仪：如MALDI-TOF或LC-MS/MS，用于蛋白质鉴定、分子量测定和杂质分析。

毛细管电泳仪：提供高分辨率的蛋白质分离和纯度分析能力。

表面等离子共振仪（如Biacore）：实时、无标记分析生物分子间相互作用的核心设备。

动态光散射仪：用于测量蛋白质粒径分布和溶液聚集状态的分析仪器。

内毒素检测仪：与鲎试剂配套使用，定量测定样品中内毒素含量的专用设备。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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