变性蛋白质免疫原性分析

检测项目

变性程度评估：通过光谱学等方法定量评估蛋白质二级、三级结构的破坏程度，是免疫原性分析的起点。

新生线性表位鉴定：识别因蛋白质展开而暴露的原本隐藏在内部的线性氨基酸序列，这些是潜在的免疫原性热点。

构象表位破坏验证：确认天然蛋白质原有的、依赖于空间结构的构象表位是否因变性而消失或改变。

聚集倾向分析：评估变性后蛋白质的聚集趋势，因为聚集体是强免疫原性的重要来源。

抗体结合能力测定：使用特异性抗体（如多克隆、单克隆抗体）检测变性蛋白与天然蛋白在抗体结合上的差异。

T细胞表位预测与验证：利用生物信息学工具预测变性可能产生的新T细胞表位，并通过体外实验进行验证。

交叉反应性分析：检测针对变性蛋白产生的抗体是否与天然蛋白或其他相关蛋白发生交叉反应。

免疫细胞激活实验：在体外用变性蛋白刺激免疫细胞（如T细胞），检测其增殖和细胞因子分泌情况。

补体激活潜力评估：分析变性蛋白是否能够通过经典或旁路途径异常激活补体系统。

动物模型体内免疫原性测试：在合适的动物模型中接种变性蛋白，检测抗体滴度、细胞免疫反应等整体免疫应答。

检测范围

重组治疗性蛋白药物：如胰岛素、生长激素、单克隆抗体等在生产和储存中可能发生变性的生物药。

疫苗抗原：包括亚单位疫苗、病毒样颗粒等，其制备过程中的变性可能影响疫苗效价和安全性。

基因治疗载体蛋白衣壳：评估腺相关病毒（AAV）等载体在生产纯化中衣壳蛋白的变性及其免疫风险。

体外诊断试剂用蛋白：确保包被在酶标板或标记的蛋白质在处理后仍保持预期的免疫反应特性。

食品工业中的加工蛋白：如经热处理的大豆蛋白、乳蛋白，分析其因变性可能产生的致敏性变化。

生物材料表面修饰蛋白：用于组织工程或植入器械的涂层蛋白，其构象改变可能引发异物反应。

科研用重组蛋白：尤其是需要变复性纯化的包涵体蛋白，需评估复性后残留的免疫原性风险。

工业酶制剂：评估在极端pH或温度下使用的酶制剂，其变性状态对使用者潜在致敏性的影响。

疾病相关错误折叠蛋白：如阿尔茨海默症中的Aβ淀粉样蛋白，研究其变性/错误折叠形式特有的免疫原性。

法医与考古样本中的降解蛋白：分析因年代久远或环境因素导致变性的蛋白质，用于物种鉴定等。

检测方法

圆二色谱（CD）：快速测定蛋白质溶液中的二级结构（α螺旋、β折叠）含量变化，判断变性程度。

荧光光谱法：利用内源荧光（如色氨酸）或外源荧光染料监测蛋白质三级结构的去折叠和聚集。

表面等离子共振（SPR）：实时、无标记地分析变性蛋白与特异性抗体或受体之间的结合动力学和亲和力。

酶联免疫吸附试验（ELISA）：使用针对天然表位或线性表位的抗体，定量比较天然与变性蛋白的免疫反应性差异。

Western Blotting：在变性条件下电泳后，用特异性抗体检测，主要用于鉴定线性表位的暴露情况。

质谱分析（MS）：结合蛋白酶解，用于精确鉴定变性后暴露的新抗原表位的氨基酸序列。

动态光散射（DLS）：测量变性蛋白质的流体力学半径分布，评估其寡聚化或聚集状态。

分析型超速离心（AUC）：高分辨率地分析蛋白质在溶液中的沉降行为，精确判断变性导致的聚集和形状改变。

T细胞增殖试验：从致敏动物或人外周血分离T细胞，与变性蛋白共培养，通过同位素掺入或CFSE染色检测增殖。

表位作图技术：采用肽扫描、氢氘交换质谱等方法，系统绘制变性前后蛋白质的抗体结合表位图谱。

检测仪器设备

圆二色谱仪：配备温控模块，用于监测温度诱导变性过程中蛋白质二级结构的动态变化。

荧光分光光度计：用于测量蛋白质的内源荧光发射光谱以及使用ANS等染料检测疏水核心暴露。

表面等离子共振仪：如Biacore系列，将抗体固化在芯片上，实时监测变性蛋白溶液的结合信号。

酶标仪：用于进行ELISA、细胞活性检测等96孔或384孔板的高通量吸光度、荧光和化学发光读数。

蛋白质电泳系统：包括SDS-PAGE垂直电泳槽和电源，用于制备变性的蛋白质样品进行Western Blot分析。

高分辨率质谱仪：如Q-TOF或Orbitrap质谱，与液相色谱联用，用于精确的表位鉴定和结构分析。

动态光散射仪：用于快速评估蛋白质样品在变性条件下的粒径分布和聚集状态。

分析型超速离心机：配备光学检测系统，是研究蛋白质溶液中聚集和构象变化的金标准设备之一。

流式细胞仪：用于分析经变性蛋白刺激后免疫细胞表面标志物的表达和细胞内细胞因子的产生。

等温滴定量热仪（ITC）：通过测量结合过程中的热变化，研究变性蛋白与抗体相互作用的 thermodynamics 参数。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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