蛋白质印迹对照

检测项目

阳性对照：使用已知表达目标蛋白的细胞或组织样本，用于验证整个实验体系的有效性。

阴性对照：使用已知不表达目标蛋白的细胞或组织样本，用于检测抗体的非特异性结合。

内参对照：检测在样本中表达量相对恒定的管家蛋白，用于校正上样量和蛋白转移效率。

空白对照：使用不含一抗或二抗的孵育液进行处理，用于检测二抗的非特异性结合。

同型对照：使用与一抗相同种属和亚型的非特异性免疫球蛋白，用于评估一抗的特异性。

未转染/空载体对照：在过表达或敲低实验中，使用未处理的或转染空载体的细胞作为对照。

Loading Control：即内参蛋白，如β-actin、GAPDH等，是内参对照的具体实施项目。

转移效率对照：通过考马斯亮蓝染色或可逆性膜染色评估蛋白从凝胶转移到膜上的效率。

蛋白标记物：使用预染或化学发光蛋白分子量标准，用于确定目标蛋白的分子量大小。

实验重复对照：在同一块胶上设置至少三个独立的生物学重复样本，确保结果的统计可靠性。

检测范围

全细胞裂解物：最常用的样本类型，用于检测细胞内总蛋白的表达水平变化。

组织分浆液：从动物或人体组织中提取的蛋白样品，用于体内表达分析。

亚细胞组分：如细胞核、线粒体、胞浆等分离组分，用于蛋白的亚细胞定位研究。

免疫沉淀产物：经过免疫共沉淀后的洗脱产物，用于检测蛋白间的相互作用。

重组蛋白：纯化的重组蛋白可作为理想的阳性对照或制作标准曲线。

血清/血浆样本：用于检测体液中的特定蛋白，如疾病标志物或抗体。

植物蛋白提取物：适用于植物学研究，检测植物组织中的目标蛋白。

细菌/酵母裂解物：用于原核或真核微生物表达系统的蛋白检测。

磷酸化蛋白：通过使用磷酸化特异性抗体，检测信号通路中蛋白的磷酸化状态。

糖基化蛋白：检测经过糖基化修饰的蛋白质，通常需要特定的富集或检测方法。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据分子量大小分离蛋白质的核心第一步。

湿式转印法：将凝胶中的蛋白电转移至PVDF或NC膜上的经典方法。

半干式转印法：转印速度较快、所需缓冲液较少的另一种常用转印技术。

丽春红S染色：一种可逆的膜染色方法，用于快速评估总蛋白转移情况。

封闭：使用BSA、脱脂奶粉等封闭膜上的非特异性结合位点。

一抗孵育：使用特异性一抗与目标蛋白结合，是决定实验特异性的关键步骤。

二抗孵育：使用偶联HRP或AP等酶的二抗与一抗结合，用于信号放大和检测。

化学发光法：最常用的检测方法，通过酶催化底物产生光信号并由X光片或成像系统捕获。

化学荧光法：使用荧光标记的二抗，通过荧光扫描仪进行检测，线性范围更宽。

显色法：使用能产生不溶性颜色沉淀的底物（如DAB），直接在膜上形成可见条带。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE，分离蛋白质的核心设备。

转印槽/转印仪：用于将凝胶中的蛋白质电转移至固相支持膜上。

电源：为电泳和转印过程提供稳定电压和电流的恒压恒流电源。

摇床：用于孵育过程中的温和振荡，确保抗体与膜充分均匀接触。

化学发光成像系统：集成CCD相机的暗箱系统，用于捕获和定量化学发光信号。

荧光扫描仪：专门用于检测荧光标记Western Blot信号的成像设备。

X光片暗盒与洗片机：传统的化学发光信号记录方式，通过X光胶片曝光和显影定影获得结果。

分析天平：精确称量药品、试剂和样本，保证溶液配制的准确性。

pH计：精确测量和调整各种缓冲液的pH值，对电泳和转印效果至关重要。

微量移液器及吸头：用于精确移取微量液体，是保证上样量准确的基础工具。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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