蛋白印迹定量测试

检测项目

目标蛋白相对表达量：通过内参蛋白校正，定量比较不同样品间特定蛋白的表达水平差异。

蛋白磷酸化水平：使用特异性磷酸化抗体，检测信号通路中关键蛋白的磷酸化修饰程度。

蛋白剪切体检测：识别并定量全长蛋白及其在凋亡或加工过程中产生的特定剪切片段。

二聚体/多聚体形成：在非还原条件下，检测蛋白通过二硫键或其他作用形成的复合物。

蛋白亚细胞定位指示：通过分离不同细胞组分（如胞浆、核蛋白）进行印迹，间接反映蛋白定位。

翻译后修饰鉴定：除磷酸化外，还可检测泛素化、乙酰化、甲基化等多种修饰状态。

抗体特异性验证：确认所用抗体是否能特异性识别目标蛋白，并评估可能的非特异性条带。

疾病生物标志物定量：在临床研究中，定量患者样本中特定生物标志物的蛋白水平。

药物处理效应评估：定量分析药物或化合物处理后，细胞或组织中靶点蛋白的表达变化。

转基因/基因敲除验证：在分子生物学实验中，验证基因操作是否成功导致目标蛋白的上调或敲低。

检测范围

细胞裂解液：来自培养细胞系或原代细胞的整体蛋白质样品，是最常见的检测样本。

组织分浆液：从动物或临床手术获取的组织样本，经研磨裂解后提取的蛋白质。

血清/血浆样本：用于检测可溶性分泌蛋白或疾病相关的循环蛋白标志物。

亚细胞组分：如细胞核提取物、线粒体提取物、胞浆蛋白等，用于定位研究。

免疫沉淀产物：通过IP或Co-IP得到的蛋白复合物，进一步分析互作蛋白。

重组蛋白：验证重组蛋白的表达、纯化效果及抗体反应性。

植物蛋白提取物：适用于植物分子生物学研究，分析植物样本中的目标蛋白。

细菌/酵母裂解物：用于微生物学研究或重组蛋白在原核/真核系统中的表达检测。

脑脊液等其他体液：在神经科学或临床研究中，分析特定体液中低丰度蛋白。

石蜡包埋组织提取蛋白：从FFPE样本中提取的蛋白质，可用于回顾性临床研究。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据分子量大小分离蛋白质混合物的核心第一步。

湿转法：将凝胶中分离的蛋白质通过电转移至PVDF或NC膜上。

半干转法：一种更快速的转膜方法，适用于多数常规蛋白的转移。

膜封闭：使用BSA或脱脂牛奶封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景。

一抗孵育：使用针对目标蛋白的特异性一抗与膜上的抗原结合。

二抗孵育：使用偶联HRP或荧光基团的二抗与一抗结合，用于信号放大与检测。

化学发光法：通过HRP催化底物产生化学发光，并用成像系统捕获信号进行定量。

荧光检测法：使用荧光标记的二抗，直接扫描荧光信号，动态范围更宽。

内参蛋白校正：同步检测GAPDH、β-actin等看家蛋白，以校正上样量差异。

图像分析与定量：使用ImageJ、Image Lab等软件对条带灰度值进行数字化定量分析。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE凝胶电泳，分离蛋白质样品。

电转仪：提供稳定电场，将凝胶中的蛋白质转移至固相支持膜上。

摇床：用于孵育过程中的温和振荡，确保抗体与抗原充分均匀接触。

化学发光成像系统：核心检测设备，用于捕获和记录化学发光信号并成像。

荧光扫描仪：专门用于检测荧光Western Blot信号的高灵敏度成像设备。

分析天平：精确称量药品、试剂及样品，保证溶液配制的准确性。

pH计：精确测量和调整电泳缓冲液、转膜缓冲液等关键溶液的pH值。

微量移液器：精确移取微量样品、抗体及试剂，确保实验重复性。

凝胶成像分析软件：对捕获的图像进行条带识别、背景扣除和灰度值定量分析。

恒温培养箱/杂交炉：提供稳定温度环境，用于膜与抗体的孵育步骤。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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