寡脱氧核糖核苷酸纯度测试

检测项目

全长序列含量：测定目标长度寡核苷酸在总产物中所占的百分比，是衡量合成效率的核心指标。

缺失序列杂质：检测因合成循环失败而产生的比目标序列短的寡核苷酸片段。

加长序列杂质：检测因合成循环过度耦合而产生的比目标序列长的寡核苷酸片段。

脱嘌呤产物：检测因嘌呤碱基（A、G）从脱氧核糖上水解脱落而产生的降解杂质。

硫代磷酸酯骨架修饰纯度：针对硫代修饰的寡核苷酸，评估硫代与非硫代（氧代）骨架的比例。

碱基修饰完整性：检测带有特殊修饰碱基（如甲基化胞嘧啶）的寡核苷酸中，修饰基团的保留情况。

有机溶剂残留：检测合成及纯化过程中可能残留的乙腈、氨水等有机溶剂。

盐分与金属离子含量：测定钠离子、钾离子等反离子以及重金属杂质的含量。

游离核苷酸与保护基团：检测未完全结合的单个核苷酸原料及合成后未完全脱除的保护基团。

核酸酶污染：评估样品中是否存在可能降解寡核苷酸的外源性核酸酶活性。

检测范围

合成粗品：对固相合成后未经纯化的原始产物进行初步纯度评估。

脱保护后产物：评估碱基及骨架保护基团脱除反应后的产物纯度和完整性。

纯化后中间品：在高效液相色谱或聚丙烯酰胺凝胶电泳等纯化步骤后，对收集组分进行纯度确认。

最终冻干成品：对作为最终产品形式的冻干粉末进行全面的放行质量检验。

溶液态储存样品：监测寡核苷酸在水或缓冲液中储存一段时间后的稳定性与降解情况。

修饰化寡核苷酸：专门针对带有荧光标记、生物素、胆固醇等特殊修饰的寡核苷酸进行纯度分析。

反义寡核苷酸与siRNA链：应用于治疗或功能研究的反义寡核苷酸及小干扰RNA单链或双链的纯度检测。

PCR引物与测序引物：确保用于聚合酶链式反应或DNA测序的引物具有高纯度，以避免非特异性扩增或背景噪音。

基因合成片段：对用于基因组装的长链寡核苷酸库或单链片段进行纯度与准确性评估。

对照品与标准品：为质量控制建立的高纯度寡核苷酸参照物质，其纯度需进行严格标定。

检测方法

高效液相色谱法（HPLC）：最常用的定量分析方法，利用反相或离子交换色谱分离并定量不同组分。

毛细管电泳法（CE）：基于电荷与大小进行分离，分辨率极高，尤其擅长检测长度相近的杂质。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：传统方法，根据分子量差异分离，常用于定性分析和制备纯化。

紫外-可见分光光度法（UV-Vis）：通过260nm处吸光度定量总寡核苷酸浓度，并通过波长扫描评估污染。

质谱分析法（MS）：特别是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）或电喷雾质谱（ESI-MS），用于精确测定分子量，确认序列长度与修饰。

核磁共振波谱法（NMR）：用于深入分析寡核苷酸的高级结构、修饰位点确认及与配体的相互作用，不常用于常规纯度测试。

酶切分析法：使用外切酶或内切酶处理，通过酶解产物的分析来推断序列末端完整性或修饰情况。

液相色谱-质谱联用法（LC-MS）：结合HPLC的分离能力与MS的鉴定能力，是进行杂质定性与定量的强大工具。

离子色谱法（IC）：专门用于精确测定样品中阴离子（如磷酸根、氯离子）和阳离子（如钠、铵离子）的含量。

荧光标记检测法：对于带有荧光基团的寡核苷酸，使用荧光检测器进行高灵敏度、高选择性的分析与定量。

检测仪器设备

高效液相色谱仪（HPLC）：配备紫外/二极管阵列检测器或荧光检测器，用于常规纯度分析与定量。

毛细管电泳仪（CE）：具有高分辨率分离能力的设备，通常配备紫外检测器。

紫外-可见分光光度计：用于快速测定样品浓度、评估A260/A280比值以判断纯度及污染物。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF MS）：用于寡核苷酸分子量的精确测定和杂质鉴定。

电喷雾质谱仪（ESI-MS）：尤其适合与液相色谱联用，用于复杂混合物中寡核苷酸的在线分析与鉴定。

制备型电泳系统：用于基于PAGE原理的大规模寡核苷酸制备与纯化。

自动凝胶成像系统：用于对染色后的PAGE胶进行图像采集和条带密度分析，实现半定量。

离子色谱仪：专门用于分析样品中无机离子和有机酸的残留量。

核酸分析仪（或生物分析仪）：基于微流控芯片技术，可快速、自动化地分析寡核苷酸的纯度、大小和浓度。

恒温孵育器与离心浓缩仪：用于样品前处理，如酶解反应、溶剂蒸发和样品浓缩等步骤。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

合作客户展示

部分资质展示