G蛋白耦合受体激活试验

检测项目

cAMP水平测定：检测GPCR激活后细胞内第二信使环磷酸腺苷浓度的变化，是Gs或Gi/o型受体功能的关键指标。

钙离子流检测：监测GPCR（尤其是Gq/11型）激活后引发的细胞内钙离子浓度瞬时升高，常用于快速反应受体分析。

β-抑制蛋白招募：评估受体激活后与β-抑制蛋白的结合能力，反映受体的脱敏、内吞及偏向性信号。

G蛋白解离与结合：直接检测GPCR与异源三聚体G蛋白亚基的结合或解离动力学，揭示激活的初始步骤。

ERK1/2磷酸化：测定细胞外信号调节激酶的磷酸化水平，作为GPCR下游MAPK通路激活的标志。

报告基因活性：通过荧光素酶等报告基因系统，间接但稳定地测量GPCR信号通路的长时程转录激活。

受体构象变化：利用生物发光共振能量转移等技术，直接探测受体激活时的跨膜结构域重排。

腺苷酸环化酶活性：直接测定催化生成cAMP的关键酶活性，评估Gs/Gi通路对效应器的直接影响。

IP3积累测定：测量三磷酸肌醇的生成量，直接反映磷脂酶C的激活状态，用于Gq型受体研究。

配体结合亲和力：通过竞争性结合实验，测定激动剂或拮抗剂与GPCR靶点的结合常数与特异性。

检测范围

新药筛选与发现：高通量筛选靶向特定GPCR的先导化合物，评估其激动或拮抗活性。

受体功能表征：系统研究野生型与突变型GPCR的配体特异性、激活效能及基础活性。

偏向性信号分析：鉴别和量化配体引发的不同下游信号通路的偏好性（如G蛋白通路 vs. β-抑制蛋白通路）。

受体脱敏与内吞研究：评估受体在持续刺激下的反应性下降及细胞膜内化过程。

孤儿受体配体鉴定：为内源性配体未知的孤儿GPCR寻找和验证其激活物质。

药物安全性与毒理评估：检测候选药物对非靶标GPCR的交叉反应，预测潜在副作用。

信号转导通路图谱绘制：阐明特定GPCR激活后涉及的完整下游信号网络。

受体二聚化研究：检测GPCR与其他受体形成同源或异源二聚体及其对功能的影响。

天然产物活性评价：从天然提取物中筛选具有GPCR调节活性的有效成分。

疾病模型机制研究：在癌症、代谢性疾病、神经精神疾病等模型中探究GPCR的功能异常。

检测方法

均相时间分辨荧光：基于镧系元素螯合物的FRET技术，用于无洗涤的cAMP、IP1或结合检测，适合高通量。

荧光成像板读数技术：结合荧光染料（如Fluo-4）在微孔板中进行实时钙流检测，空间分辨率高。

生物发光共振能量转移：通过荧光素酶与荧光蛋白的能量转移，实时监测活细胞内蛋白质相互作用（如GPCR-β-arrestin）。

酶联免疫吸附测定：采用特异性抗体定量细胞裂解物中磷酸化蛋白（如pERK）或第二信使的含量。

报告基因测定法：将GPCR响应元件与荧光素酶等报告基因相连，通过检测酶活性间接反映通路激活。

膜电位敏感染料法：利用对膜电位敏感的荧光染料，间接反映某些GPCR（如嗅觉受体）激活引起的离子通道变化。

放射性配体结合分析：使用放射性标记配体进行竞争结合实验，是测定受体亲和力的经典金标准方法。

表面等离子共振技术：实时、无标记地监测GPCR与G蛋白或配体在生物芯片表面的结合动力学。

微生理动态检测：通过测量细胞外酸化率等参数，无标记地实时监测GPCR激活引起的细胞整体代谢反应。

免疫共沉淀与蛋白质印迹：用于验证GPCR与下游信号分子（如G蛋白亚基）的物理结合及蛋白表达水平。

检测仪器设备

多功能微孔板检测仪：集成光吸收、荧光、发光、FRET等多种检测模式，是进行高通量筛选的核心设备。

荧光成像显微镜系统：配备高灵敏度相机和温控系统，用于单细胞或亚细胞水平的钙成像和蛋白定位研究。

流式细胞仪：可用于基于荧光的高通量单细胞分析，如检测磷酸化蛋白或报告基因表达。

化学发光/荧光读板机：专门用于快速读取96/384/1536孔板的发光或荧光信号，效率极高。

实时细胞分析仪：通过微电极阵列无标记、实时监测细胞阻抗变化，反映GPCR介导的形态与粘附改变。

表面等离子共振仪：用于实时、无标记分析分子间相互作用动力学的高端设备，需将受体固定于芯片表面。

闪烁亲近测定仪：专门用于读取放射性信号（如SPA珠子）的微孔板读数器，用于传统结合实验。

活细胞动态分析工作站：整合了精确流体加样、气体控制和高速成像，用于毫秒级响应的钙流动力学研究。

等温滴定量热仪：通过测量结合过程的热变化，精确测定配体-受体相互作用的亲和力与热力学参数。

自动化液体处理工作站：实现加样、稀释、转移等步骤的自动化，确保高通量筛选的准确性与重复性。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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