腺苷二磷酸核糖同位素标记实验

检测项目

ADP-核糖（ADPR）定量分析：测定样品中ADP-核糖分子的绝对或相对含量，是评估相关代谢通路活性的基础。

聚ADP-核糖（PAR）链长与分支度：分析由PARP酶催化生成的聚ADP-核糖聚合物的链长度和分支结构。

蛋白质ADP-核糖基化修饰位点鉴定：精确鉴定被ADP-核糖基化修饰的蛋白质上的特定氨基酸残基（如天冬氨酸、谷氨酸）。

单ADP-核糖基化与多ADP-核糖基化区分：区分蛋白质上是连接了单个ADP-核糖单元还是长长的PAR链。

NAD+前体掺入效率：评估标记的NAD+前体（如同位素标记的烟酰胺）被细胞摄取并转化为NAD+的效率。

ADP-核糖基化动态周转率：研究ADP-核糖基化修饰的生成与去除（如通过PARG酶）的动态过程。

特定PARP酶活性测定：在复杂体系中，评估特定PARP家族成员（如PARP1， PARP2）的催化活性。

MARylation与PARylation产物比例：量化单ADP-核糖基化与多ADP-核糖基化产物的相对比例。

ADP-核糖基化修饰的底物谱分析：大规模鉴定在特定生理或病理条件下发生ADP-核糖基化的所有蛋白质。

代谢中间产物追踪：追踪标记原子从NAD+流向ADPR、PAR乃至最终降解产物的完整代谢路径。

检测范围

体外酶反应体系：包含纯化的PARP酶、底物蛋白和同位素标记NAD+的简化生化反应系统。

完整细胞裂解液：从经过同位素标记处理的细胞中提取的总蛋白或亚细胞组分裂解液。

活细胞代谢标记：在细胞培养基中添加稳定或放射性同位素标记的前体，对活细胞内源性代谢物进行标记。

亚细胞器组分：分离的细胞核、线粒体、细胞质等特定细胞器中的ADP-核糖基化事件。

免疫沉淀复合物：通过抗体富集特定蛋白或其修饰形式（如PAR化蛋白），分析其结合的ADP-核糖。

组织匀浆样本：从动物或临床组织样本中制备的匀浆，用于研究生理病理状态下的修饰变化。

基因敲除/敲低模型对比：比较野生型与特定基因（如PARP， PARG）缺失细胞或组织的标记模式差异。

药物或应激处理样本：研究DNA损伤剂、PARP抑制剂或其他刺激对ADP-核糖代谢网络的影响。

时间进程样本：在不同时间点取样，追踪ADP-核糖基化修饰随时间的生成、累积与清除动态。

不同物种来源样本：适用于从酵母、植物到哺乳动物细胞等多种生物体系的比较研究。

检测方法

放射自显影与磷屏成像：使用32P或3H标记的NAD+后，通过凝胶电泳分离，利用胶片或磷屏检测放射性信号。

液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）：高灵敏度、高分辨率的首选方法，用于精确鉴定修饰位点、定量及代谢流分析。

薄层色谱法（TLC）：一种经典的分离技术，用于分离和初步鉴定不同长度的ADP-核糖聚合物。

基于抗性的Western Blotting：使用特异性识别ADP-核糖或PAR的抗体进行免疫印迹检测。

闪烁计数法：对含有放射性同位素标记的样品或色谱条带进行液体闪烁计数，实现绝对定量。

亲和纯化结合质谱：利用ADP-核糖结合模块（如宏结构域）富集修饰肽段，再进行质谱分析。

酶联免疫吸附试验（ELISA）：使用特异性抗体，对样品中的ADPR或PAR进行高通量、相对定量。

荧光辅助凝胶电泳：将ADP-核糖聚合物用荧光染料标记后电泳，通过荧光扫描进行检测。

核磁共振波谱（NMR）：利用稳定同位素标记（如13C），在原子水平研究ADP-核糖的结构和代谢动力学。

点击化学结合流式或成像：将带有炔烃等手柄的NAD+类似物掺入细胞，通过点击化学反应连接荧光探针进行可视化检测。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪：如Q-Exactive， Orbitrap系列，用于精确质量测定和复杂样品中修饰肽段的鉴定与定量。

液相色谱系统：与质谱联用的纳流或毛细管液相色谱，用于在线分离肽段或代谢物。

磷屏成像仪：用于高灵敏度、定量地检测和记录凝胶或膜上的放射性同位素信号。

液体闪烁计数器：用于精确测量溶液中或从TLC板刮下的样品中的放射性活度。

化学发光成像系统：用于捕获Western Blot实验中抗体检测产生的化学发光信号。

薄层色谱展开槽与点样器：用于TLC分析的标准设备，包括玻璃槽和微量点样毛细管或自动点样仪。

高效毛细管电泳仪：一种替代色谱的分离技术，可用于分离不同电荷和大小的ADP-核糖相关分子。

荧光扫描仪：用于扫描含有荧光标记ADP-核糖聚合物的凝胶或膜。

核磁共振波谱仪：高场强的NMR仪，用于分析稳定同位素标记的ADP-核糖及其代谢物的结构和动态。

细胞培养与处理设备：包括CO2培养箱、生物安全柜等，用于进行活细胞的同位素代谢标记实验。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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