蛋白相互作用分析

检测项目

相互作用验证：通过实验确认两个或多个目标蛋白之间是否存在直接的物理结合。

结合亲和力测定：定量测量蛋白质相互作用的强度，常用参数为解离常数（Kd）。

相互作用结构域/位点定位：鉴定参与相互作用的具体蛋白质结构域或关键氨基酸残基。

相互作用动力学分析：研究蛋白质结合与解离的速率常数（Kon, Koff）。

复合物组成鉴定：鉴定由多个蛋白质组成的稳定复合物中的所有成员。

竞争性结合分析：研究小分子、肽段或其他蛋白对特定蛋白相互作用的抑制或干扰效应。

翻译后修饰对相互作用的影响：分析磷酸化、泛素化等修饰如何调控蛋白互作。

细胞内定位共现分析：验证相互作用的蛋白在细胞内的亚细胞定位是否重叠或共迁移。

功能表型关联分析：将特定的蛋白相互作用与细胞增殖、凋亡、信号传导等生物学功能相关联。

相互作用网络构建：整合多个互作数据，绘制出在特定通路或细胞状态下的蛋白互作网络图。

检测范围

体外重组蛋白：使用纯化的重组蛋白在无细胞体系中进行互作分析，条件可控。

原核生物蛋白：针对细菌等原核生物来源的蛋白质进行相互作用研究。

真核生物蛋白：涵盖酵母、植物、动物等真核细胞中表达的蛋白质。

膜蛋白相互作用：专门研究位于细胞膜上的蛋白质（如受体、通道蛋白）之间的互作。

核酸-蛋白复合物：研究蛋白质与DNA或RNA之间的特异性结合作用。

小分子-蛋白相互作用：检测药物、代谢物等小分子配体与靶蛋白的结合。

全细胞裂解液：在复杂的细胞裂解液背景JianCe测内源性蛋白的相互作用。

活细胞实时监测：在活细胞生理环境下，实时观测蛋白质相互作用的动态过程。

组织样本原位分析：在完整的组织切片JianCe测蛋白互作，保留空间位置信息。

种间蛋白互作：研究来自不同物种（如病原体与宿主）的蛋白质之间的交叉相互作用。

检测方法

酵母双杂交系统：基于转录因子重建的原理，在酵母体内检测蛋白互作的经典遗传学方法。

免疫共沉淀：利用特异性抗体捕获靶蛋白及其互作伴侣，从复杂混合物中富集互作复合物。

Pull-down实验：将诱饵蛋白固定于亲和基质上，从溶液（如细胞裂解液）中“下拉”与之结合的猎物蛋白。

表面等离子共振技术：实时、无标记地监测生物分子间的结合与解离过程，提供动力学数据。

荧光共振能量转移：通过供体与受体荧光基团间的能量转移效率，检测纳米尺度内的蛋白接近或结合。

双分子荧光互补技术：将荧光蛋白分割成两个片段，分别与目标蛋白融合，互作使荧光恢复。

交联质谱分析：使用化学交联剂稳定蛋白复合物，通过质谱鉴定交联位点，揭示互作界面和拓扑结构。

蛋白质片段互补分析：将报告蛋白（如酶）分成两个无活性片段，由蛋白互作使其重构并恢复活性。

噬菌体展示技术：将外源肽段或蛋白展示在噬菌体表面，用于筛选与靶蛋白结合的配体。

微量热泳动技术：基于分子在温度梯度场中的迁移变化，测量溶液中的分子结合亲和力。

检测仪器设备

表面等离子共振仪：如Biacore系列，用于实时、无标记分析分子互作动力学和亲和力。

等温滴定量热仪：通过精确测量结合过程释放或吸收的热量，直接测定结合常数和热力学参数。

荧光显微镜：用于观察FRET、BiFC等荧光技术示踪的活细胞内蛋白互作定位与动态。

共聚焦显微镜：提供高分辨率的断层扫描图像，更精确地分析蛋白共定位与互作。

酶标仪：配备荧光、化学发光等检测模块，用于高通量读取基于ELISA、报告基因等的互作实验结果。

蛋白质纯化系统：如AKTA系统，用于制备高纯度的重组蛋白样品，为体外互作研究提供材料。

质谱仪

高效液相色谱仪：常与质谱联用，用于分离和鉴定免疫共沉淀或Pull-down实验中的复杂蛋白混合物。

微量热泳动仪：如Monolith系列，用于快速、低样品消耗的溶液内亲和力测定。

生物膜干涉技术仪

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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