糖型相对定量分析
发布时间:2026-03-19
糖型相对定量分析是糖组学研究中的核心技术,旨在对不同样品中特定糖链结构的相对丰度进行精确测量与比较。本检测系统阐述了该技术的核心检测项目、覆盖的生物分子范围、主流分析方法及关键仪器设备,为理解糖基化修饰的生物学功能、疾病标志物发现及生物药物质量控制提供全面的技术视角。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
N-糖链相对丰度分析:测定蛋白质天冬酰胺连接糖链(N-糖)各具体结构的相对含量,用于比较不同样品间N-糖基化修饰差异。
O-糖链相对丰度分析:测定蛋白质丝氨酸/苏氨酸连接糖链(O-糖)各具体结构的相对含量,常用于黏蛋白等分析。
唾液酸化程度分析:定量分析糖链末端唾液酸修饰的相对水平,与蛋白质功能、半衰期及免疫原性密切相关。
岩藻糖基化水平分析:测定核心岩藻糖或末端岩藻糖的相对含量,是炎症和癌症相关的重要糖基化修饰。
半乳糖基化指数:评估糖链非还原末端半乳糖的相对比例,在抗体药物效应功能评价中至关重要。
高甘露糖型比例:测定高甘露糖型N-糖链的相对占比,反映蛋白质折叠与加工状态,是生物药关键质量属性。
平分型GlcNAc分析:检测β1,4-连接的N-乙酰葡糖胺修饰的相对水平,与多种疾病状态相关。
糖链分支度分析:评估复杂型N-糖链天线数(如二天线、三天线、四天线)的相对分布。
游离寡糖分析:对细胞或体液中未与蛋白质或脂质结合的寡糖进行相对定量,用于先天性糖基化疾病筛查。
糖胺聚糖二糖组成分析:对硫酸软骨素、肝素等糖胺聚糖降解后的特征二糖进行相对定量,解析其精细结构。
检测范围
血清/血浆总蛋白:对血液中所有蛋白质的总体糖基化谱进行相对定量分析,寻找疾病生物标志物。
特异性抗体(如IgG):聚焦于免疫球蛋白G的Fc段和Fab段糖型,研究其与自身免疫病、癌症的关联。
重组治疗性蛋白:对单克隆抗体、融合蛋白、酶替代疗法药物等进行糖型监控,确保产品一致性与有效性。
细胞膜表面糖蛋白:分析细胞表面受体、粘附分子等的糖型,研究细胞识别、信号转导过程。
外泌体与囊泡:对细胞分泌的胞外囊泡表面携带的糖链进行表征,探索其在细胞间通讯中的作用。
组织裂解液:从特定组织(如肿瘤组织)中提取糖蛋白,进行原位糖型分析,反映病理状态。
植物多糖与糖蛋白:分析植物来源多糖的精细结构或植物表达重组蛋白的糖基化修饰。
微生物胞外多糖:对细菌、真菌产生的荚膜多糖或脂多糖部分结构进行相对定量,用于疫苗开发与病原学研究。
脑脊液与尿液蛋白:对体液中的低丰度糖蛋白进行高灵敏度糖型分析,用于神经系统疾病或肾脏疾病研究。
糖脂与糖鞘脂:对神经节苷脂等含有寡糖链的脂类分子进行结构解析与相对定量。
检测方法
液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS):主流的高通量、高灵敏度方法,能实现复杂样品中多种糖链的分离与相对定量。
亲水作用色谱(HILIC):常与LC-MS联用,基于糖链亲水性进行高效分离,是糖型分析的经典色谱方法。
多反应监测(MRM):一种靶向质谱扫描模式,对预设的特定糖链离子对进行高选择性、高重复性的相对定量。
标记释放与衍生化:使用2-AB、ProA等荧光试剂或同位素标签标记释放的糖链,增强检测灵敏度并实现绝对/相对定量。
凝集素芯片技术:利用固定化凝集素阵列高通量筛查样品中整体糖链结合模式,快速比较不同样品间的糖谱差异。
毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF):具有极高分离效率,常用于带电荷唾液酸化糖链或标记后中性糖链的高分辨率分析。
酶解与糖苷酶阵列:使用一系列特异性糖苷酶(如唾液酸酶、岩藻糖苷酶)顺序酶切,结合质谱或色谱分析推断糖链结构。
离线MALDI-TOF MS分析:基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱常用于完整糖链或糖肽的质谱指纹图谱获取与半定量比较。
超高效液相色谱(UPLC)荧光检测:使用UPLC分离荧光标记糖链,通过荧光强度进行相对定量,成本较低且通量高。
同位素相对标记与绝对定量(iTRAQ/TMT):利用同位素编码标签对不同样品进行标记,混合后上机,实现多组间差异糖蛋白/糖肽的相对定量。
检测仪器设备
超高效液相色谱仪(UPLC/Nano-LC):提供高压、高分辨率的色谱分离,是复杂糖链样品分离的前端核心设备。
三重四极杆质谱仪(QqQ MS):进行靶向MRM定量分析的金标准仪器,具有优异的定量线性范围与重复性。
高分辨率质谱仪(Q-TOF/Orbitrap):提供精确质量数测定,用于未知糖链结构的鉴定与非靶向糖组学相对定量分析。
基质辅助激光解吸电离源(MALDI):常与TOF或离子阱质谱联用,擅长分析完整糖链混合物,样品前处理简单快速。
荧光检测器:连接在HPLC或UPLC系统后,用于检测荧光标记糖链,灵敏度高,专一性强。
毛细管电泳系统:配备紫外或激光诱导荧光检测器,用于高分辨率分离带电或衍生化后的糖链。
凝集素芯片扫描仪:专用干读取凝集素芯片上荧光信号的激光共聚焦扫描仪或微阵列扫描仪。
自动化样品处理工作站:实现从蛋白消化、糖链释放、纯化到衍生化的全流程或部分流程自动化,提高重现性与通量。
在线固相萃取装置:与LC-MS系统在线联用,实现对低丰度样品的自动富集、脱盐与进样,提升检测灵敏度。
数据处理与生物信息学软件:如Skyline、Byos、GlycoWorkbench等,专门用于糖质谱数据的解卷积、定量分析与结构解析。
检测服务范围
1、指标检测:按国标、行标及其他规范方法检测
2、仪器共享:按仪器规范或用户提供的规范检测
3、主成分分析:对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。
4,样品前处理:对产品进行预处理后,进行样品前处理,包括样品的采集与保存,样品的提取与分离,样品的鉴定以及样品的初步分析,通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;
5、深度分析:根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测,然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。
合作客户展示
部分资质展示