蛋白杂质检测试验

检测项目

宿主细胞蛋白残留：检测来源于表达系统（如CHO、大肠杆菌）的非目标宿主蛋白，是评估工艺纯化效果的关键指标。

宿主细胞DNA残留：定量分析产品中残留的宿主细胞基因组DNA片段，以控制潜在的安全风险。

蛋白A残留：检测在抗体纯化过程中从亲和层析介质（如Protein A）上脱落的配体，可能引起免疫反应。

内毒素：检测革兰氏阴性菌细胞壁成分脂多糖，是衡量产品致热原性的核心安全指标。

产品相关杂质（聚集体）：检测目标蛋白分子形成的二聚体、寡聚体或更高阶聚集体，影响产品药效和安全性。

产品相关杂质（片段）：检测因降解或酶切产生的目标蛋白片段，如抗体轻链、重链或Fab/Fc片段。

培养基成分残留：检测培养过程中添加的、可能残留在产品中的成分，如胰岛素、生长因子或抗生素。

纯化试剂残留：检测纯化工艺中使用的化学试剂残留，如洗涤剂、还原剂、有机溶剂等。

病毒与微生物污染：检测外源性病毒、细菌、支原体等微生物污染，是生物安全性的强制要求。

氧化/脱酰胺等修饰变体：检测目标蛋白在生产和储存过程中发生的化学修饰，如甲硫氨酸氧化、天冬酰胺脱酰胺。

检测范围

治疗性单克隆抗体：包括人源化、嵌合及全人源抗体，是杂质检测应用最广泛的领域。

重组治疗性蛋白：如细胞因子、激素、酶、凝血因子等通过基因工程技术生产的蛋白质药物。

融合蛋白：由两种以上不同基因序列编码的蛋白功能域融合而成的治疗蛋白。

疫苗（蛋白亚单位疫苗）：由病原体特定蛋白抗原构成的疫苗，需严格控制生产过程中引入的杂质。

血液制品：如人血白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子等，需检测血浆来源的相关杂质。

基因治疗载体：如腺相关病毒载体生产过程中产生的宿主细胞和辅助病毒蛋白杂质。

细胞治疗产品上清：检测细胞培养上清或裂解液中的杂质，用于过程控制和终产品放行。

诊断用蛋白试剂：确保诊断试剂（如酶联免疫试剂）的准确性和特异性，需控制杂质水平。

生物类似药：与原研药进行全面的质量对比，杂质谱分析是证明相似性的核心内容之一。

临床前与临床研究样品：在药物研发各阶段对候选药物进行杂质监控，支持安全性评价。

检测方法

酶联免疫吸附测定法：利用抗原-抗体特异性反应进行定性和定量分析，常用于HCP、Protein A残留检测。

聚合酶链式反应法：高灵敏度、特异性检测宿主细胞DNA残留的分子生物学方法。

高效液相色谱法：基于不同理化性质对蛋白进行分离和分析，包括反相色谱、离子交换色谱等模式。

尺寸排阻色谱法：基于流体动力学体积分离蛋白质，是分析蛋白聚集体和片段的首选方法之一。

毛细管电泳法：在毛细管中基于电荷和大小分离分析物，分辨率高，样品消耗少。

质谱分析法：提供精确分子量及结构信息，用于鉴定未知杂质和翻译后修饰分析。

凝胶电泳法：包括SDS-PAGE和Native-PAGE，用于初步评估蛋白纯度、分子量及聚集状态。

浊度法/显色基质法：用于快速定量检测样品中的内毒素含量。

圆二色谱法：通过测量蛋白质的圆二色性来研究其二级结构变化，间接反映杂质影响。

生物测定法：利用细胞或动物模型评估具有生物活性的杂质（如生长因子）的残留效应。

检测仪器设备

酶标仪：用于读取ELISA等基于微孔板的检测实验的光密度信号，实现高通量分析。

实时荧光定量PCR仪：用于执行qPCR实验，对宿主DNA残留进行精确定量。

高效液相色谱仪：配备不同检测器（如UV、荧光），是进行各类色谱分析的核心设备。

紫外-可见分光光度计：用于快速测定蛋白质浓度以及部分杂质的初步筛查。

毛细管电泳仪：实现高分辨率的蛋白分离和纯度分析，尤其适用于电荷异质性分析。

质谱仪：包括液相色谱-质谱联用仪和高分辨质谱仪，用于杂质的鉴定和深度表征。

凝胶成像系统

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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