蛋白免疫印迹测试

检测项目

目标蛋白表达水平：检测特定蛋白在细胞或组织样本中的相对或绝对表达量，是Western Blot最基础的应用。

蛋白磷酸化状态：使用磷酸化特异性抗体，检测信号通路中关键蛋白的激活状态，反映细胞功能活动。

蛋白剪切与加工：检测前体蛋白（如Pro-caspase）被剪切为活性形式（如Cleaved-caspase）的过程，常用于细胞凋亡研究。

蛋白二聚化/多聚化：在非还原条件下，检测蛋白通过二硫键或其他作用形成的复合物，如受体二聚化。

蛋白亚细胞定位指示：通过分离不同细胞组分（如胞浆、胞核、线粒体）的蛋白，间接推断目标蛋白的定位。

蛋白翻译后修饰：除磷酸化外，还可检测泛素化、乙酰化、甲基化等修饰，揭示蛋白功能调控机制。

突变体或异构体检测：利用特异性抗体区分蛋白的不同突变体或由可变剪切产生的异构体。

蛋白相互作用验证：与免疫共沉淀联用，验证两个蛋白是否存在直接的物理相互作用。

抗体特异性验证：通过观察预期分子量处单一条带，验证新购或自制抗体的特异性。

疾病生物标志物筛查：在疾病与正常样本中比较特定蛋白的表达差异，寻找潜在的诊断或预后标志物。

检测范围

细胞培养样本：包括贴壁细胞、悬浮细胞、原代细胞及各种细胞系的裂解液，是机制研究的主要材料。

动物组织样本：从小鼠、大鼠到临床手术获取的人体组织，用于在体水平研究蛋白表达与功能。

植物组织样本：适用于植物生理、抗逆及遗传改良研究中植物蛋白的检测。

细菌与酵母样本：用于原核或真核表达系统产物的鉴定，以及微生物本身的蛋白功能研究。

血清与血浆样本：检测体液中的可溶性蛋白、自身抗体或外泌体相关蛋白，用于疾病诊断研究。

脑脊液与关节液：针对神经系统疾病或关节炎等，检测其中特定的蛋白标志物。

蛋白质纯化组分：在蛋白纯化过程中，追踪目标蛋白在各步洗脱组分中的分布与纯度。

外泌体与囊泡蛋白：分离外泌体后，检测其携带的特征性蛋白（如CD63、TSG101）及内容物。

转基因生物样本：验证转基因或基因敲除/敲入动物、植物中目标蛋白的表达改变。

临床病理标本：福尔马林固定石蜡包埋组织经抗原修复后，也可用于Western Blot分析。

检测方法

样本制备与裂解：使用RIPA等裂解液在低温下破碎细胞/组织，并加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂以保持蛋白原始状态。

蛋白浓度测定：采用BCA法或Bradford法对裂解液进行精确定量，确保上样量一致。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据目标蛋白分子量选择合适浓度的凝胶，在电场下使蛋白按分子量大小分离。

蛋白转膜：通过湿转或半干转法将凝胶中的蛋白条带转移至PVDF或NC膜上，形成固相支持物。

膜封闭：使用5%脱脂牛奶或BSA溶液封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景信号。

一抗孵育：用针对目标蛋白的特异性一抗（多克隆或单克隆）与膜在4℃下孵育过夜。

二抗孵育：用耦联了HRP或荧光基团的种属特异性二抗与一抗结合，室温孵育1-2小时。

化学发光检测：对于HRP系统，加入ECL发光底物，在暗室中通过X光胶片或化学发光成像仪捕获信号。

荧光检测：对于荧光二抗，使用特定波长的激光扫描成像仪直接扫描膜，获得荧光信号。

内参蛋白检测：使用β-actin、GAPDH、Tubulin等管家蛋白抗体作为内参，对目标蛋白信号进行均一化校正。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE，核心部件是玻璃板夹心形成的凝胶灌制空间。

电源：提供稳定、可调节的直流电压和电流，驱动蛋白在凝胶中的迁移。

转印装置：包括转印槽、夹子、海绵和滤纸，用于完成蛋白从凝胶到膜的转移过程。

摇床：用于孵育抗体和洗膜过程中，确保溶液与膜充分、均匀地接触。

化学发光成像系统：核心检测设备，包含高灵敏度CCD相机和暗箱，用于捕获和定量ECL发光信号。

荧光扫描成像仪：能够发射特定波长激光并检测荧光信号，适用于多重荧光Western Blot。

凝胶成像系统（可选）：用于电泳后考马斯亮蓝或荧光染料染色的凝胶成像，检查上样与分离效果。

微量分光光度计：用于快速、准确地测定蛋白样本的浓度，如NanoDrop仪器。

低温高速离心机：用于样本制备时快速离心，沉淀细胞碎片，获取澄清的上清蛋白液。

制冰机与-20℃/-80℃冰箱：为样本、抗体、试剂的储存以及实验过程提供必要的低温环境。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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