根瘤菌胞外多糖色谱分离试验

检测项目

总糖含量测定：采用苯酚-硫酸法或蒽酮-硫酸法，定量分析样品中总多糖的浓度。

蛋白质含量测定：使用Bradford法或BCA法，检测并去除与多糖共存的蛋白质杂质。

核酸含量测定：通过紫外分光光度法测定260nm处吸光度，评估核酸污染程度。

单糖组成分析：通过酸水解将多糖解离为单糖，进而分析其种类与摩尔比例。

分子量分布测定：利用凝胶渗透色谱技术，分析多糖组分的分子量大小及其分布范围。

官能团鉴定：通过红外光谱分析，鉴定多糖分子中羟基、羧基、氨基等特征官能团。

电荷性质分析：检测多糖的等电点及表面电荷，评估其离子交换行为。

纯度评估：综合色谱峰形、电泳条带及光谱数据，对分离后多糖组分的纯度进行评价。

结构单元连接方式：通过甲基化分析、核磁共振等技术，推断单糖间的连接键型。

生物活性初筛：对分离组分进行促植物生长、免疫调节等初步生物活性测试。

检测范围

发酵液上清：根瘤菌液体培养后，离心去除菌体所得的含有粗胞外多糖的液体。

粗多糖提取物：通过醇沉、盐析等方法从发酵上清中初步沉淀获得的多糖混合物。

脱蛋白样品：经Sevag法或酶法去除游离蛋白后的多糖溶液。

脱色后样品：使用活性炭或过氧化氢处理以去除色素杂质的澄清多糖液。

透析后样品：经透析去除小分子杂质（如无机盐、单糖）的纯化多糖。

离子交换组分：通过离子交换色谱初步分离得到的、不同电荷性质的多糖组分。

凝胶过滤组分：经凝胶渗透色谱分离后，按分子量大小收集的各个级分。

高效液相色谱峰：利用HPLC进一步分离后，于特定保留时间收集的单一性更高的组分。

冷冻干燥粉末：将纯化后的多糖溶液冷冻干燥获得的固体样品，用于后续深度分析。

标准品对照样品：已知结构的多糖标准品，用于方法建立与结果比对。

检测方法

醇沉法：向培养上清中加入乙醇，使多糖沉淀析出，实现初步分离与浓缩。

Sevag法脱蛋白：利用氯仿和正丁醇混合液振荡，去除与多糖结合的蛋白质。

透析与超滤：利用半透膜或超滤膜，基于分子尺寸差异去除小分子杂质或进行分级。

离子交换色谱：依据多糖所带电荷的差异，使用DEAE-纤维素等介质进行分离纯化。

凝胶过滤色谱：基于多糖分子流体力学体积的不同，在凝胶柱上进行分离，常用于分子量测定。

高效液相色谱：采用高效色谱柱（如氨基柱、凝胶柱）进行高分辨率分离与分析。

高效凝胶渗透色谱：连接多角度光散射与示差折光检测器的GPC系统，用于精确测定绝对分子量。

气相色谱：将多糖衍生化为挥发性衍生物后，分析其单糖组成。

红外光谱法：通过特征吸收峰对多糖中的官能团进行定性鉴定。

苯酚-硫酸法：利用多糖在浓硫酸作用下水解、脱水生成糠醛衍生物，与苯酚显色进行总糖定量。

检测仪器设备

高速冷冻离心机：用于快速分离菌体与发酵上清，以及后续沉淀物的收集。

冷冻干燥机：将纯化后的多糖溶液在低温真空下脱水，制成易于保存的固体粉末。

透析袋与超滤系统：用于脱盐、去除小分子杂质及按分子量进行初筛。

紫外-可见分光光度计：用于核酸、蛋白质含量测定及部分比色法糖含量分析。

离子交换色谱系统：包含输液泵、色谱柱和组分收集器，用于按电荷分离多糖。

凝胶渗透色谱系统：配备示差折光检测器，用于分析多糖分子量分布。

高效液相色谱仪：高精度输液泵、自动进样器和多种检测器，实现复杂多糖的高效分离。

多角度激光光散射仪：与HPLC/GPC联用，在线测定多糖的绝对分子量与构象信息。

气相色谱仪：配备火焰离子化检测器或质谱检测器，用于精确分析单糖组成。

傅里叶变换红外光谱仪：提供多糖分子化学键和官能团的指纹图谱信息。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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