抗体纯化效率分析

检测项目

蛋白浓度：测定纯化前后样品中总蛋白的含量，用于计算回收率与质量平衡。

单体纯度：评估目标抗体单体占总蛋白的比例，是衡量纯化效果的核心指标。

聚集体含量：检测抗体高分子量聚集体的水平，聚集体会影响产品安全性与有效性。

宿主细胞蛋白残留：定量检测来源于宿主细胞（如CHO、大肠杆菌）的非目标蛋白杂质。

宿主细胞DNA残留：测定纯化后样品中残留的宿主细胞基因组DNA含量，是重要的安全性指标。

Protein A配基残留：检测因Protein A亲和层析而可能渗漏并残留在产品中的配基含量。

内毒素含量：测定样品中细菌内毒素的水平，直接关系到产品的热原安全性。

抗体片段与降解产物：分析因酶切或应激产生的抗体轻链、重链或Fab/Fc片段。

电荷异质性：评估抗体因脱酰胺、糖基化等修饰导致的电荷变体（如酸性、碱性峰）分布。

生物学活性：通过细胞学或生化方法测定抗体的特异功能活性，确认纯化过程未破坏其功能结构。

检测范围

细胞培养收获液：纯化工艺的起始点，用于分析初始抗体浓度、杂质谱及确定纯化挑战。

深层过滤后样品：评估澄清步骤对细胞碎片、大颗粒杂质的去除效率及抗体损失情况。

亲和层析洗脱峰：分析Protein A或其它亲和层析后的产物纯度、聚集体及配基残留的关键节点。

低pH病毒灭活后样品：评估病毒灭活步骤对抗体聚集、片段化及活性可能产生的影响。

离子交换层析流穿/洗脱液：监测精纯步骤对宿主细胞蛋白、DNA、内毒素及电荷异质性的去除效果。

疏水层析后样品：分析用于去除聚集体和疏水性杂质的层析步骤的效率。

纳米过滤后样品：验证病毒去除滤器对病毒样颗粒及大分子聚集体的截留能力。

超滤/渗滤浓缩液：评估换液和浓缩步骤的回收率、样品浓度以及最终制剂缓冲液的组成。

除菌过滤后原液：纯化工艺的终点，进行全面的质量属性检测，代表最终纯化产物。

工艺中间品池：对多个批次或循环的中间产物进行合并分析，用于工艺稳健性评估。

检测方法

高效液相色谱法：包括尺寸排阻色谱、反相色谱、离子交换色谱等，用于分析纯度、聚集体和电荷变体。

酶联免疫吸附测定法：高灵敏度、高特异性的方法，用于定量宿主细胞蛋白、DNA及Protein A配基残留。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：基于分子量分离蛋白质，用于初步评估纯度、片段及降解情况。

毛细管电泳法：包括毛细管区带电泳和毛细管等电聚焦，用于高分辨率分析电荷异质性和纯度。

紫外-可见分光光度法：基于280nm处吸光度快速测定蛋白浓度，是常规的在线或离线检测手段。

动态光散射法：通过测量颗粒的布朗运动来测定流体力学半径，用于快速评估聚集体和颗粒大小分布。

微量内毒素检测法：基于鲎试剂与内毒素的凝集反应，定量检测样品中的内毒素污染水平。

qPCR法：利用特异性引物扩增宿主DNA片段，是检测痕量宿主细胞DNA残留的金标准方法。

生物层干涉技术：实时、无标记地测量分子间相互作用，用于结合活性、浓度及动力学分析。

细胞基生物测定法：利用报告基因或细胞增殖/抑制效应，定量测定抗体的生物学功能活性。

检测仪器设备

高效液相色谱系统：配备不同检测器（UV， FLD）和色谱柱，进行各类HPLC分析的核心设备。

酶标仪：用于读取ELISA等微孔板实验的吸光度、荧光或化学发光信号，实现高通量检测。

毛细管电泳仪：实现高分辨率、自动化电荷异质性、纯度及分子量分析的精密仪器。

紫外-可见分光光度计：用于蛋白质浓度测定、扫描光谱以及部分纯度分析的常规光学设备。

动态光散射仪：专门用于测量蛋白质溶液粒径分布和聚集状态的仪器，样品用量少。

凝胶成像系统：用于对SDS-PAGE、Western Blot等凝胶进行染色后成像和条带定量分析。

内毒素检测仪：与鲎试剂配套使用，用于精确测定内毒素含量的专用光度计或浊度仪。

实时荧光定量PCR仪：进行宿主细胞DNA残留定量检测的关键设备，灵敏度极高。

生物层干涉仪：无标记分子互作分析仪，用于实时监测抗体与抗原的结合活性与动力学。

细胞培养与检测平台：包括生物安全柜、CO2培养箱、细胞计数仪等，用于开展细胞活性测定。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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