替尔泊肽等电点测定

检测项目

等电点（pI）理论计算值：基于替尔泊肽的氨基酸序列，利用软件计算其理论等电点，作为实验测定的参考基准。

溶液pH值测定：精确测定替尔泊肽在不同缓冲体系或滴定过程中溶液的实时pH值，是确定等电点的直接参数。

样品净电荷分析：通过电泳迁移率或电位分析，确定替尔泊肽在不同pH条件下所带净电荷的正负及大小。

等电聚焦电泳（IEF）条带位置：观察替尔泊肽在IEF凝胶上的聚焦条带位置，该位置对应的pH梯度值即为其实验等电点。

毛细管等电聚焦（cIEF）谱图分析：通过cIEF获得的电泳谱图，根据迁移时间或内标定位，精确计算替尔泊肽的等电点。

Zeta电位-pH曲线零点：测定替尔泊肽在不同pH下的Zeta电位，绘制曲线，曲线与零电位线交点对应的pH即为等电点。

溶解度最低点pH确认：测定替尔泊肽在不同pH缓冲液中的溶解度，溶解度最低点通常接近其等电点。

电荷异构体分布：分析替尔泊肽可能存在的因修饰或降解产生的电荷变异体，及其各自的等电点分布。

缓冲液离子强度影响评估：考察不同离子强度的缓冲液对替尔泊肽表观等电点测定的影响，优化测定条件。

方法学验证：对所选测定方法的专属性、精密度、准确度和线性范围进行验证，确保结果可靠。

检测范围

原料药（API）：对替尔泊肽原料药本体进行等电点测定，表征其基本的理化性质。

制剂成品：测定最终制剂中替尔泊肽的等电点，用于成品质量控制与稳定性评估。

工艺中间体：在合成或纯化工艺的不同阶段取样测定，监控等电点变化以优化工艺。

强制降解样品：对经过酸、碱、氧化、光照等强制降解处理的样品进行测定，考察等电点的稳定性。

不同批次对比：对比分析不同生产批次替尔泊肽的等电点，确保批次间一致性。

参比制剂：测定原研或参比制剂的等电点，作为仿制药研发和质量对比的标杆。

结构类似物：对比测定替尔泊肽与其结构类似物或衍生物的等电点，研究结构-性质关系。

溶液稳定性研究样品：对在不同温度、时间条件下储存的溶液样品进行测定，评估等电点随时间的变化。

与辅料相互作用研究：考察制剂中辅料是否存在与替尔泊肽的电荷相互作用，从而影响其表观等电点。

生物类似药表征：作为生物类似药关键质量属性（CQA）之一，进行全面的等电点表征和比对。

检测方法

毛细管等电聚焦（cIEF）：当前最精确和主流的方法，在毛细管中形成pH梯度，样品聚焦后通过紫外或全柱成像检测。

凝胶等电聚焦电泳（IEF）：传统方法，在含有载体两性电解质的凝胶上进行，通过考马斯亮蓝染色或银染色显色。

Zeta电位滴定法：通过自动滴定仪改变样品pH，并同步测量Zeta电位，由电位零点确定等电点。

等电点沉淀法：通过调节pH观察溶液浊度或离心沉淀量，溶解度最低点对应的pH近似为等电点。

离子交换色谱法（IEC）：通过改变流动相pH，观察替尔泊肽在离子交换柱上的保留行为变化来估算等电点。

pH梯度溶液溶解度扫描法：制备一系列不同pH的缓冲液，加入等量样品后测定上清液浓度，确定最小溶解度pH。

二维电泳（2-DE）：第一维为IEF，第二维为SDS-PAGE，可同时获得等电点和分子量信息，用于复杂样品分析。

成像毛细管等电聚焦（icIEF）：cIEF的先进形式，采用全柱成像检测器，无需迁移，可直接观察整个毛细管内的聚焦过程。

理论计算法：使用生物信息学软件（如Expasy的Compute pI/Mw工具）根据氨基酸序列计算理论等电点。

联用技术（如LC-cIEF）：将液相色谱与cIEF联用，先进行分离纯化，再进行等电点分析，适用于复杂基质。

检测仪器设备

毛细管等电聚焦仪（cIEF）：核心设备，包含高压电源、毛细管温控系统、紫外或激光诱导荧光检测器。

全柱成像毛细管等电聚焦仪（icIEF）：配备全柱成像紫外检测器，可直接对聚焦区带进行实时成像和定量分析。

等电聚焦电泳系统：包括电泳槽、预制或自灌制IEF凝胶、专用电源和冷却装置。

Zeta电位及粒度分析仪：用于测量Zeta电位，通常配备自动滴定模块，可进行pH扫描滴定。

精密pH计：用于精确测定缓冲液和样品溶液的pH值，需定期用标准缓冲液校准。

自动电位滴定仪：可程序化控制滴定过程，精确添加酸、碱以改变pH，并同步记录pH和电信号。

紫外-可见分光光度计：用于等电点沉淀法中浊度测定，或测量溶解度扫描中的蛋白浓度。

高效液相色谱系统（HPLC）：用于离子交换色谱法或作为cIEF的样品前处理及后续分析工具。

成像系统（凝胶扫描仪）：用于对染色后的IEF凝胶进行数字化成像和条带密度分析。

生物信息学软件：用于基于氨基酸序列进行等电点、电荷分布等理论计算与预测。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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