电转后自噬水平分析

检测项目

LC3-II蛋白印迹定量分析：通过Western Blot检测LC3-II蛋白的表达量，这是评估自噬体形成的经典分子标志物。

p62/SQSTM1蛋白降解检测：监测自噬底物p62的蛋白水平变化，其积累表明自噬流被阻断，降解则表明自噬活性正常。

自噬流双标腺病毒/mCherry-GFP-LC3报告系统检测：利用mCherry（耐酸）和GFP（酸敏感）荧光蛋白标记LC3，通过荧光显微镜区分自噬体（黄点）与自噬溶酶体（红点），直接监测自噬流完整性。

透射电子显微镜形态学观察：直接观察细胞超微结构，识别并计数双层膜结构的自噬体，是评估自噬的金标准。

细胞活力与凋亡关联分析：通过MTT/CCK-8或Annexin V/PI流式细胞术检测细胞活力与凋亡，分析自噬水平变化与电转后细胞命运的关系。

自噬相关基因（ATG）表达谱分析：利用qRT-PCR或RNA-seq技术，检测电转后一系列自噬相关基因（如ATG5, ATG7, Beclin-1）的转录水平变化。

溶酶体活性与酸化检测：使用LysoTracker Red等荧光探针标记酸性细胞器，评估自噬下游溶酶体的功能状态。

免疫荧光染色定位分析：对LC3、p62等蛋白进行免疫荧光染色，观察其在细胞内的定位与聚集情况。

线粒体自噬特异性检测：通过检测PINK1/Parkin通路蛋白或使用mito-Keima等探针，评估电转是否诱导线粒体选择性自噬。

长期克隆形成能力评估：通过平板克隆形成实验，分析电转及引发的自噬水平变化对细胞长期增殖能力的潜在影响。

检测范围

贴壁细胞系：适用于HEK293、HeLa、MEF等常见贴壁细胞电转后的自噬水平分析。

悬浮细胞系：涵盖Jurkat、THP-1、原代淋巴细胞等悬浮细胞在电穿孔后的自噬响应。

原代细胞与干细胞：包括从组织分离的原代细胞（如神经元、肝细胞）及多种干细胞电转后的自噬状态评估。

体内电转组织：适用于活体组织电穿孔（如小鼠骨骼肌、皮肤、肿瘤原位电转）后局部组织的自噬水平检测。

不同电转参数组：对比分析不同电压、脉宽、脉冲次数等电转参数下细胞自噬水平的差异。

不同电转缓冲液组：评估使用不同离子成分、渗透压的电转缓冲液对细胞自噬的潜在影响。

基因过表达或敲低模型：检测电转递送特定基因（如促自噬或抑自噬基因）后，细胞自噬通路的改变。

药物或应激处理组合：分析电转与自噬诱导剂（如雷帕霉素）或抑制剂（如氯喹）联合处理下的协同或拮抗效应。

时间动力学范围：覆盖电转处理后即刻（0-2小时）、早期（6-12小时）及晚期（24-72小时）多个时间点的动态监测。

亚细胞器水平：检测范围延伸至自噬体、溶酶体、线粒体、内质网等与自噬过程密切相关的细胞器。

检测方法

Western Blotting：提取细胞总蛋白，通过SDS-PAGE分离，使用抗LC3、p62等一抗进行免疫印迹，定量分析目标蛋白条带灰度值。

免疫荧光显微镜术：细胞固定、透化后，用特异性一抗和荧光二抗染色，在共聚焦荧光显微镜下观察自噬相关蛋白的定位与斑点形成。

流式细胞术：对荧光报告系统（如mCherry-GFP-LC3）转染的细胞或使用荧光自噬探针的细胞进行定量分析，获取群体细胞的平均荧光强度与阳性率。

透射电子显微镜术：将细胞样品进行戊二醛固定、锇酸后固定、脱水、包埋、超薄切片及醋酸铀-柠檬酸铅染色后，在透射电镜下观察拍照。

实时荧光定量PCR：提取细胞总RNA，反转录为cDNA，使用SYBR Green或TaqMan探针法对自噬相关基因的mRNA表达水平进行相对定量。

荧光探针标记与活细胞成像：使用LysoTracker、CYTO-ID等商品化自噬荧光探针进行活细胞染色，通过时间 lapse 成像动态监测自噬过程。

报告基因检测法：电转携带自噬响应元件（如LC3启动子）驱动荧光素酶或荧光蛋白的报告质粒，通过检测报告基因活性间接反映自噬转录调控。

细胞活力与毒性检测法：采用MTT、CCK-8或LDH释放实验，评估电转过程及后续自噬水平变化对细胞代谢活性和膜完整性的影响。

免疫组织化学：针对体内电转的组织样本，进行石蜡包埋、切片，采用IHC方法检测组织中自噬标志物的表达与分布。

图像分析与统计学处理：使用ImageJ、CellProfiler等软件对Western Blot条带、荧光图片中的斑点进行计数与强度分析，并采用t检验、方差分析等进行统计学比较。

检测仪器设备

电穿孔仪：提供可控电脉冲的核心设备，如Bio-Rad Gene Pulser Xcell、Nepa Gene电转仪等，用于对细胞进行电转处理。

蛋白电泳及转印系统：包括垂直电泳槽、电源和湿转/半干转转印仪，用于Western Blotting中的蛋白分离与转移。

化学发光成像系统：用于捕获和定量分析Western Blot膜上的化学发光信号，如Bio-Rad ChemiDoc MP。

激光共聚焦荧光显微镜：高分辨率观察自噬荧光报告系统和免疫荧光样品的关键设备，如Zeiss LSM系列、Leica SP8。

流式细胞仪：用于对大量细胞进行快速、定量的荧光分析，如BD FACSCanto、Beckman CytoFLEX。

透射电子显微镜：观察细胞超微结构和自噬体形态的必备高分辨率仪器，如Hitachi HT7800、JEOL JEM-1400。

实时荧光定量PCR仪：用于检测自噬相关基因mRNA表达水平的定量分析设备，如Applied Biosystems QuantStudio系列。

多功能酶标仪：具备吸光度、荧光和化学发光检测功能，用于细胞活力（MTT/CCK-8）和部分报告基因检测，如Tecan Spark。

活细胞成像工作站：配备环境控制（温控、CO2）的倒置荧光显微镜，用于长时间动态监测活细胞的自噬过程。

超速/高速离心机：用于细胞收集、细胞器分离（如提取溶酶体）及蛋白、RNA样本制备过程中的离心步骤。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

合作客户展示

部分资质展示