荧光定量PCR仪单细胞分析

检测项目

单细胞基因表达定量：在单个细胞内对特定mRNA转录本进行绝对或相对定量，是分析细胞功能状态的核心。

稀有转录本检测：在复杂细胞群体中，识别并定量表达量极低的mRNA，发现稀有细胞亚群或特殊状态。

单细胞基因分型：基于特定SNP或突变位点，在单细胞水平进行基因型鉴定，用于克隆演化或遗传异质性研究。

单细胞融合基因检测：在肿瘤单细胞JianCe测染色体易位产生的特异性融合基因，追踪肿瘤克隆起源。

单细胞病毒载量检测：定量单个感染细胞内的病毒核酸拷贝数，揭示病毒感染的动态和细胞间差异。

单细胞miRNA表达分析：检测单个细胞内微小RNA的表达水平，研究其在细胞调控网络中的作用。

单细胞长非编码RNA分析：对单个细胞中的lncRNA进行表达谱分析，探索其在表观遗传调控中的功能。

单细胞等位基因特异性表达：区分并定量来自父本和母本等位基因的表达水平，研究基因组印记等现象。

单细胞拷贝数变异推断：通过多个标志基因的定量数据，间接推断单细胞基因组中DNA拷贝数的变化。

单细胞多重PCR靶向测序文库构建：利用多重引物对进行预扩增，为后续的高通量测序制备单细胞cDNA文库。

检测范围

肿瘤异质性研究：解析肿瘤微环境中不同癌细胞的基因表达差异、耐药克隆和进化路径。

干细胞与发育生物学：追踪胚胎发育或组织再生过程中单个干细胞的命运决定和分化轨迹。

免疫细胞功能分型：精细区分淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞的亚型、激活状态和细胞因子表达谱。

神经科学研究：分析不同神经元或胶质细胞类型的特异基因表达，理解神经环路和疾病机制。

微生物单细胞分析：研究难以培养的微生物在单细胞水平的基因表达和代谢活性，避免群体平均效应。

循环肿瘤细胞分析：对极少量从肿瘤原发灶脱落的CTC进行分子特征分析，用于液体活检。

生殖细胞与早期胚胎研究：分析卵母细胞、精子及早期胚胎卵裂球细胞的基因表达和表观遗传状态。

药物反应异质性：在单细胞水平评估同一药物处理后，不同细胞在基因表达和存活方面的差异反应。

细胞周期相关基因表达：将单个细胞的基因表达数据与其所处的细胞周期阶段相关联。

病原体-宿主相互作用：在单个感染细胞内同时分析宿主防御基因和病原体基因的表达动态。

检测方法

单细胞分离与捕获：通过流式细胞分选、显微操作、微流控芯片或激光捕获显微切割等技术获取单个细胞。

细胞裂解与RNA释放：使用化学裂解液或物理方法破碎单细胞膜，释放出细胞内总RNA，同时灭活RNase。

逆转录反应：在单个反应管中加入逆转录酶和引物，将微量的单细胞mRNA反转录为cDNA第一链。

全转录组预扩增：采用基于PCR的扩增方法或体外转录法，对单细胞cDNA进行全局性扩增，以获得足够检测的量。

靶向基因预扩增：使用多重PCR引物池，对数十至数百个目标基因进行特异性扩增，提高检测通量和灵敏度。

qPCR引物与探针设计：针对目标基因设计高特异性、高效率的引物和探针，通常采用TaqMan探针法或SYBR Green染料法。

微流体芯片qPCR：将预扩增产物加载至集成有数千个纳升级反应孔的微流控芯片上，进行大规模并行qPCR反应。

384孔板高通量qPCR：将样本分配至384孔板，使用高通量qPCR仪同时对大量单细胞的多个基因进行检测。

数据分析与标准化：使用ΔΔCt法或绝对定量法分析数据，并引入内参基因或外标进行标准化，以校正技术误差。

质量控制：设立无模板对照、无逆转录对照以及阳性对照，并评估扩增效率和检出限，确保数据可靠性。

检测仪器设备

高通量荧光定量PCR系统：核心检测设备，具备多通道荧光检测能力，可快速完成384孔或更高通量的反应。

微流体动态阵列芯片系统：集成微流控芯片的专用qPCR平台，能在单张芯片上完成数千个纳升反应，样本和试剂消耗极低。

单细胞分离平台：包括流式细胞分选仪、显微操作仪或自动单细胞分离器，用于精确、高效地获取单个活细胞。

微流控单细胞捕获芯片：通过物理结构或液滴微流控技术，实现高通量、自动化的单细胞捕获与反应体系构建。

超灵敏核酸分析仪：用于评估单细胞RNA质量、浓度以及预扩增产物质量的设备，如生物分析仪。

低吸附移液与分液系统：包括PCR板封膜机、纳升级精密移液器和自动化液体处理工作站，以处理微量样本并减少吸附损失。

超净工作台或生物安全柜：为单细胞操作和预扩增前步骤提供无菌无核酸酶的环境，防止污染。

高速离心机与PCR仪：用于样本制备过程中的离心步骤，以及进行逆转录、预扩增等温度循环反应。

深低温冰箱：用于长期保存分离的单细胞、提取的RNA、cDNA及预扩增产物，通常需要-80°C储存条件。

数据分析工作站与软件：配备高性能计算机和专业的qPCR数据分析软件，用于处理大量单细胞qPCR数据并进行可视化。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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