抑制剂亚型选择性验证

检测项目

激酶活性抑制率测定：通过检测化合物对特定亚型激酶催化活性的抑制程度，计算IC50值，评估其直接抑制效力。

ATP竞争性结合实验：验证抑制剂是否通过与ATP结合口袋竞争性结合来发挥作用，是判断其作用模式的基础。

结合亲和力（KD）测定：使用生物物理方法直接测量抑制剂与靶蛋白亚型的解离常数，定量评估结合强度。

结合动力学分析：测定抑制剂的结合速率常数（kon）与解离速率常数（koff），深入理解其作用时效和选择性机制。

选择性谱（Selectivity Panel）筛选：在包含数十至数百个相关蛋白亚型的平台上进行广谱筛选，初步评估脱靶风险。

细胞内靶点占有率检测：在细胞水平验证抑制剂能否有效结合并占据目标亚型，反映其细胞通透性与实际作用能力。

下游信号通路抑制验证：检测化合物对特定亚型下游关键磷酸化蛋白或信号分子活性的影响，确认其功能性抑制效果。

细胞增殖/毒性测定：在依赖特定亚型的细胞系中评估抑制剂的抗增殖活性，关联生化活性与细胞表型。

代谢稳定性预判实验：通过检测抑制剂与常见代谢酶（如CYP450亚型）的相互作用，间接评估其潜在亚型选择性。

共晶结构解析：通过X射线衍射获得抑制剂-靶点复合物三维结构，从原子层面揭示选择性结合的分子基础。

检测范围

激酶家族亚型：涵盖AGC、CMGC、TK等主要激酶家族内高度同源的亚型，如PKA、PKB、PKC；JNK1/2/3等。

GPCR受体亚型：针对同一内源性配体对应的不同受体亚型（如5-HT1A、5-HT2A等）进行选择性验证。

离子通道亚型：包括电压门控、配体门控离子通道的不同亚单位组合，如Nav1.1-Nav1.9通道亚型。

核受体亚型：对同一超家族内的受体（如PPARα, γ, δ；RARα, β, γ）进行选择性结合与激活/抑制测试。

磷酸二酯酶（PDE）亚型：覆盖PDE1-PDE11多个家族中功能各异的亚型，评估抑制剂对特定亚型的选择性。

组蛋白去乙酰化酶（HDAC）亚型：针对I类、IIa类、IIb类及IV类HDAC中的具体亚型进行酶活抑制检测。

蛋白酶体亚基：验证抑制剂对免疫蛋白酶体与组成型蛋白酶体特定催化亚基（如β1c, β1i, β5c, β5i）的选择性。

表观遗传读写器蛋白：涵盖BET家族（BRD2,3,4,T）、甲基化阅读器等不同结构域亚型的选择性识别。

转运蛋白亚型：如单胺转运蛋白（DAT, NET, SERT）或ABC转运蛋白家族不同成员的选择性相互作用评估。

结构同源的非靶标蛋白：将激酶、受体等靶点所属超家族中结构相似但功能无关的蛋白作为阴性对照纳入检测范围。

检测方法

放射性配体结合分析法：使用放射性标记的配体竞争性结合实验，直接测定抑制剂对特定亚型的结合亲和力与选择性。

荧光偏振（FP）技术：利用荧光标记的探针与靶蛋白结合后偏振光的变化，快速、均相地检测抑制剂的竞争性结合。

时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）：基于镧系元素供体与受体之间的能量转移，进行高灵敏度、低背景的酶活或结合检测。

表面等离子共振（SPR）技术：实时、无标记地监测抑制剂与固定化蛋白亚型的结合动力学，获取kon、koff及KD值。

等温滴定量热法（ITC）：通过精确测量结合过程的热量变化，直接获取结合常数、化学计量比和热力学参数。

微量热泳动（MST）技术：利用分子结合前后热泳动行为的差异，在溶液中进行高灵敏度的亲和力测定，样品消耗量少。

基于活性探针的蛋白质组学分析：使用广谱或选择性活性探针，在细胞或组织裂解液层面全局性评估抑制剂对多个亚型的占据情况。

细胞热位移分析（CETSA）：基于化合物结合提高靶蛋白热稳定性的原理，在细胞或组织原位检测靶点占有率。

酶联免疫吸附测定（ELISA）：用于定量检测抑制剂处理后细胞或组织中特定信号通路磷酸化水平的变化，验证功能性选择。

Western Blotting分析：通过检测特定蛋白亚型及其修饰状态（如磷酸化），在细胞水平验证抑制剂的亚型选择性功能效应。

检测仪器设备

多功能酶标仪：具备吸光度、荧光、化学发光、时间分辨荧光、荧光偏振等多种检测模式，用于高通量生化检测。

表面等离子共振仪（如Biacore）：用于实时、无标记地分析分子间相互作用动力学，是亲和力与选择性测定的金标准设备之一。

等温滴定量热仪：直接测量生物分子结合过程中的热量变化，提供最全面的热力学结合参数。

微量热泳动仪：用于溶液中分子相互作用的快速、高灵敏度亲和力测定，对样品要求低，应用范围广。

放射性活度计数仪：用于检测放射性配体结合实验中的信号，是传统但可靠的直接结合实验核心设备。

高效液相色谱-质谱联用仪：用于复杂样品（如细胞裂解液）中化合物浓度及代谢产物的定量分析，辅助细胞水平选择性验证。

自动化液体处理工作站：实现高通量筛选和选择性谱测试中试剂的精准、快速加样，保证实验的重复性与效率。

实时荧光定量PCR仪：用于检测抑制剂处理后特定基因表达的变化，间接评估其对相关亚型通路的选择性影响。

蛋白质纯化系统：用于制备高纯度、高活性的重组靶蛋白亚型，是进行高质量生化与生物物理检测的前提。

X射线单晶衍射仪：用于解析抑制剂-靶点复合物的高分辨率三维晶体结构，为选择性机制提供最直观的结构生物学证据。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

合作客户展示

部分资质展示