pull-down凝胶成像系统结合特异性检测

检测项目

GST融合蛋白Pull-down：利用谷胱甘肽S转移酶标签与固定化谷胱甘肽的亲和力，纯化并捕获与之相互作用的靶蛋白。

His标签蛋白Pull-down：通过组氨酸标签与镍离子等金属离子的螯合作用，分离和鉴定相互作用的蛋白复合物。

生物素标记Pull-down：利用生物素与链霉亲和素/亲和素之间极强的非共价结合，进行高亲和力的分子互作捕获。

免疫共沉淀验证：作为Co-IP的补充验证手段，在体外确认抗体所识别抗原蛋白的直接相互作用伴侣。

RNA结合蛋白鉴定：通过将特定RNA序列固定于磁珠，下拉与之结合的RNA结合蛋白并进行检测。

DNA-蛋白质相互作用分析：使用生物素标记的特定DNA片段下拉转录因子等DNA结合蛋白。

小分子-靶蛋白相互作用验证：将小分子药物或化合物固定化，下拉细胞裂解液中与之结合的靶点蛋白。

泛素化修饰检测：利用泛素或特定泛素链结合域下拉修饰的靶蛋白，分析泛素化修饰状态。

磷酸化依赖性互作研究：研究蛋白质磷酸化修饰对其与其他蛋白相互作用的影响。

受体-配体结合分析：在体外验证细胞表面受体与其可溶性配体之间的特异性结合。

检测范围

重组蛋白：适用于原核或真核系统表达并纯化的带有特定标签的重组蛋白。

细胞裂解液：涵盖各种哺乳动物细胞、细菌、酵母等全细胞裂解液中的内源性蛋白。

组织分浆液：可用于从动物或植物组织样本中提取的复杂蛋白质混合物。

血清/血浆样本：适用于检测血液中特异性抗体或循环蛋白的相互作用。

体外转录/翻译产物：检测由无细胞系统合成的放射性或荧光标记的蛋白质。

核酸片段：包括单链/双链DNA、RNA、以及经过化学修饰的核酸探针。

小分子化合物库：可用于筛选与目标蛋白有相互作用的小分子候选药物。

蛋白文库：如噬菌体展示文库，用于筛选与诱饵蛋白相互作用的未知蛋白。

修饰肽段：研究特定翻译后修饰肽段与识别结构域（如SH2结构域）的结合。

病毒蛋白与宿主蛋白：研究病原体蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用，揭示感染机制。

检测方法

琼脂糖珠/磁珠法：将诱饵分子固定在琼脂糖珠或磁性微球上，用于捕获溶液中的相互作用分子。

直接Pull-down：将纯化的标签蛋白作为诱饵，直接与含有潜在互作蛋白的样本孵育。

间接Pull-down：通过桥接抗体或标签蛋白，间接捕获没有直接固定化标签的诱饵蛋白及其互作分子。

竞争性Pull-down：加入游离的竞争分子，验证相互作用的特异性，并计算结合亲和力。

SDS-PAGE分离：将Pull-down产物通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子量大小分离。

Western Blotting：将凝胶上的蛋白转印至膜上，使用特异性一抗和二抗进行免疫检测。

考马斯亮蓝/银染显色：对凝胶进行通用型蛋白染色，直观显示下拉得到的蛋白条带。

化学发光成像：针对Western Blot，使用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶底物产生化学发光信号并采集图像。

荧光成像检测：使用荧光标记的二抗或直接标记的蛋白，在特定波长下进行荧光信号采集，灵敏度高。

放射性自显影：若使用放射性同位素标记的蛋白或核酸，可通过压片或磷屏成像仪进行检测。

检测仪器设备

化学发光凝胶成像系统：核心设备，用于捕获和记录Western Blot膜或凝胶上的化学发光信号。

荧光凝胶成像系统：配备特定激发和发射滤光片，用于检测荧光染料标记的蛋白或核酸。

多功能酶标仪：可用于Pull-down实验前期的蛋白定量以及部分均相互作检测。

垂直电泳系统：用于进行SDS-PAGE，分离Pull-down实验得到的蛋白复合物。

半干/湿式转印系统：将凝胶中分离的蛋白高效、均匀地转印至PVDF或硝酸纤维素膜上。

恒温摇床/旋转仪：在Pull-down孵育和洗脱步骤中，确保样品充分混合和反应。

高速冷冻离心机：用于样本预处理、沉淀蛋白以及快速收集磁珠。

磁力架：配合磁性微球，方便、快速地进行液相分离和多次洗涤操作。

蛋白定量仪（分光光度计）：精确测定蛋白浓度，确保Pull-down实验中投入的蛋白量一致。

化学发光底物自动喷膜机：确保Western Blot化学发光底物均匀、定量地覆盖在膜上，提高结果重复性。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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