核酸杂质残留量检测

检测项目

宿主DNA残留量：检测生产过程中使用的宿主细胞（如大肠杆菌、CHO细胞）基因组DNA的残留水平，是评估产品纯度和安全性的关键指标。

宿主RNA残留量：检测来源于宿主细胞的各类RNA杂质，其过量残留可能影响下游应用或引发非预期免疫反应。

质粒DNA残留量：在利用质粒进行生产的工艺中，检测最终产品中未完全去除的原始质粒DNA模板。

酶蛋白残留量：检测生产过程中使用的各种工具酶（如限制性内切酶、DNA聚合酶、连接酶等）的残留量。

抗生素残留量：检测发酵或筛选阶段添加的抗生素（如氨苄青霉素、卡那霉素）是否在纯化后产品中仍有残留。

内毒素含量：检测由革兰氏阴性菌产生的脂多糖杂质，其具有强致热原性，是注射用核酸产品的必检安全项目。

蛋白质A残留量：在使用Protein A亲和层析纯化相关产品的工艺中，检测从填料中脱落的Protein A配体。

工艺相关杂质：检测纯化过程中使用的有机溶剂、沉淀剂（如乙醇、异丙醇）、去污剂等化学试剂的残留。

核酸酶活性：检测产品中是否存在具有活性的核酸酶（如DNase、RNase），其存在会导致产品降解，影响稳定性。

外源性DNA序列：针对特定风险序列（如病毒基因、致癌基因）进行特异性检测，评估其潜在生物安全风险。

检测范围

质粒DNA产品：用于基因治疗、DNA疫苗或基因编辑的质粒DNA，需严格检测宿主杂质、内毒素及工艺残留。

mRNA疫苗与药物：包括预防性疫苗和治疗性mRNA药物，重点检测体外转录模板DNA残留、酶残留及脂质纳米粒相关杂质。

病毒载体基因治疗产品：如腺相关病毒（AAV）、慢病毒载体等，需检测包装细胞DNA/RNA、辅助质粒DNA及复制型病毒等。

寡核苷酸药物：如反义寡核苷酸、siRNA、适配体等，需检测合成过程中短片段失败序列、有机溶剂及金属离子残留。

PCR及相关试剂：检测用于分子诊断的PCR酶、引物、探针等试剂中的杂质，确保检测特异性和灵敏度。

基因编辑工具：如CRISPR-Cas9核糖核蛋白复合物或相关mRNA/gDNA，需检测细菌来源的蛋白与核酸杂质。

细胞治疗产品：对经过基因修饰的细胞产品（如CAR-T），需检测转导所用病毒载体或mRNA的残留。

血液制品：筛查血浆来源制品中可能含有的外源性病原体核酸，保障输血安全。

重组蛋白与抗体药物：虽然主要成分为蛋白，但若使用核酸技术生产（如转基因动物细胞），也需检测相关核酸杂质。

疫苗原液与成品：无论是传统减毒疫苗还是新型核酸疫苗，其原液、半成品和成品均需进行全面的杂质残留监控。

检测方法

定量PCR（qPCR）：高灵敏度、高特异性的DNA定量金标准方法，广泛应用于宿主DNA、特定序列DNA的绝对定量。

数字PCR（dPCR）：提供绝对定量而不依赖标准曲线，尤其适用于痕量核酸残留的精确定量和复杂基质中的检测。

荧光染色法（如PicoGreen）：利用荧光染料特异性结合双链DNA进行定量，快速但无法区分DNA来源，常用于总DNA残留筛查。

酶联免疫吸附法（ELISA）：基于抗原-抗体反应，主要用于检测蛋白质类杂质，如酶残留、Protein A残留等。

鲎试剂法（LAL）：检测内毒素的经典方法，包括凝胶法、浊度法和显色法，具有高灵敏度和特异性。

高效液相色谱法（HPLC）：如离子交换色谱、反相色谱，可用于分离和定量不同大小的核酸片段或某些有机溶剂残留。

毛细管电泳法（CE）：高效分离技术，可用于分析寡核苷酸产品中的短片段杂质及纯度。

下一代测序（NGS）：用于深度分析产品中可能存在的未知或低丰度核酸杂质序列，进行全面风险评估。

Southern Blot：传统核酸杂交技术，可用于检测特定序列的DNA残留，特异性高但操作繁琐。

生物测定法：如核酸酶活性测定，通过底物降解等生物活性来评估功能性杂质的残留。

检测仪器设备

实时荧光定量PCR仪：进行qPCR检测的核心设备，用于DNA的扩增与实时荧光信号采集。

数字PCR系统：实现液滴生成、PCR扩增和荧光分析的集成平台，用于超灵敏的绝对定量。

荧光酶标仪：用于读取基于荧光或化学发光的检测信号，如PicoGreen法、荧光ELISA等。

微孔板读数仪：读取ELISA等基于吸光度（OD值）的检测结果的标准设备。

内毒素检测仪：与鲎试剂配套使用的专用仪器，用于动态浊度法或显色法内毒素检测的孵育与读数。

高效液相色谱系统：配备相应检测器（如UV、荧光），用于核酸或小分子杂质的分离与定量分析。

毛细管电泳系统：配备紫外或激光诱导荧光检测器，用于高分辨率核酸片段分析。

下一代测序仪：进行深度测序以全面鉴定核酸杂质序列组成的高通量设备。

核酸蛋白测定仪：基于紫外吸收原理，快速测定核酸或蛋白样品的浓度与纯度，用于初步筛查。

凝胶成像系统：用于对琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳后的核酸条带进行拍照和分析，辅助定性或半定量。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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