小胶质细胞抑制剂筛选检测

检测项目

细胞活力检测：使用MTT或CCK-8试剂评估抑制剂毒性，测量参数为细胞存活率百分比（范围0-100%），检测精度±5%误差。

炎症因子水平测定：通过ELISA技术量化TNF-α、IL-6浓度，参数单位为pg/mL，检测限0.1 pg/mL，线性范围1-1000 pg/mL。

细胞迁移抑制率：采用Transwell迁移实验，计算迁移细胞数减少比例，参数包括抑制率百分比（0-100%），重复性CV≤10%。

吞噬功能评估：利用荧光标记颗粒（如荧光微珠），测量吞噬效率，参数为吞噬指数（0-5），检测时间24小时。

活性氧（ROS）产生检测：使用DCFH-DA探针，量化ROS水平，参数为相对荧光单位（RFU），动态范围10-1000 RFU。

细胞凋亡分析：通过Annexin V/PI双染色，流式细胞术检测凋亡细胞比例，参数包括早期凋亡率（%）和晚期凋亡率（%），灵敏度95%。

基因表达变化：qRT-PCR技术检测炎症相关基因（如iNOS、IL-1β），参数为相对表达倍数变化（fold change），误差±0.5倍。

蛋白表达水平：Western blot分析iNOS、COX-2蛋白，参数为条带密度比值，定量精度±10%。

钙离子流检测：Fluo-4 AM探针测量细胞内钙浓度，参数为荧光强度变化（ΔF/F0），范围0-1000 nM。

信号通路激活：NF-κB通路报告基因系统，参数为荧光素酶活性（RLU），检测限100 RLU。

细胞周期分析：PI染色流式细胞术，参数为G0/G1、S、G2/M期细胞比例（%），分辨率±2%。

自噬评估：LC3-II免疫荧光标记，参数为自噬泡数量/细胞，计数精度±5个。

膜电位变化检测：JC-1探针分析线粒体膜电位，参数为红绿荧光比值，范围0.1-10。

细胞因子分泌谱：多重微珠阵列检测IL-10、TGF-β等，参数为浓度pg/mL，通量>20因子/样本。

氧化应激标记：测量GSH/GSSG比值，参数为还原型谷胱甘肽浓度（μM），准确度±5 μM。

检测范围

小胶质细胞系：如BV2、N9细胞系，用于高通量初步筛选，模拟炎症响应。

原代小胶质细胞：从啮齿类动物脑组织分离，提供生理相关模型，评估抑制剂体内外一致性。

神经炎症模型：LPS诱导的小胶质细胞激活，测试抗炎化合物在模拟疾病环境中的效果。

神经退行性疾病模型：Aβ或α-synuclein刺激模型，应用于阿尔茨海默病或帕金森病研究。

药物候选物筛选：化合物库中的小分子抑制剂，优化药物开发流程。

天然产物提取物：植物或微生物来源提取物，评估其抗小胶质细胞活化潜力。

合成化合物：新设计有机分子，测试其抑制效率和选择性。

生物制剂：抗体或肽类抑制剂，用于靶向特定受体通路。

医疗器械涂层：植入材料表面处理，评估其对小胶质细胞活性的影响。

环境毒素评估：重金属或污染物暴露模型，研究神经毒性机制。

干细胞分化研究：诱导多能干细胞分化为小胶质细胞，探索发育调控。

疫苗佐剂测试：评估佐剂成分对小胶质细胞免疫应答的作用。

基因编辑细胞：CRISPR-Cas9修饰细胞系，分析特定基因缺失下的抑制剂响应。

共培养系统：神经元-小胶质细胞共培养，模拟神经单元交互。

体内外相关性模型：结合动物实验数据，验证体外筛选结果。

检测标准

ISO 10993-5:2009 医疗器械生物学评价 - 第5部分：细胞毒性试验，规范细胞活力检测方法。

ASTM E2523-13 体外细胞毒性试验标准指南，用于定量评估抑制剂毒性。

GB/T 16886.5-2017 医疗器械生物学评价 - 第5部分：细胞毒性试验，规定细胞培养和测试条件。

ISO 19001 质量管理体系要求，确保检测过程标准化和可追溯。

ICH S2(R1) 遗传毒性物质检测指南，适用于抑制剂安全性评估。

GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范，涵盖细胞实验操作规范。

ISO 17025 检测和校准实验室能力通用要求，保证数据准确性和一致性。

ASTM F2721-09 细胞迁移试验标准，指导Transwell实验执行。

GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法，相关炎症因子检测。

ISO 15189 医学实验室质量和能力要求，应用于基因和蛋白表达分析。

ANSI/AAMI ST72-2019 生物负载检测标准，用于细胞污染控制。

GB/T 37861-2019 细胞计数和活力测定方法，规范MTT/CCK-8检测。

ISO 20391-1:2018 细胞计数标准，确保细胞数量准确性。

ASTM E3072-17 流式细胞术标准指南，用于凋亡和表型分析。

GB/T 33209-2016 细胞培养实验室安全要求，管理生物安全风险。

检测仪器

酶标仪：用于比色或荧光检测，在本检测中测量细胞活力（如MTT吸光度）和炎症因子浓度，支持96孔板高通量分析。

流式细胞仪：实现多参数细胞分析，在本检测中评估凋亡率、吞噬功能和表面标记表达，提供单细胞分辨率数据。

倒置显微镜：观察细胞形态和迁移行为，在本检测中监控Transwell实验迁移细胞数，配备相衬或荧光模块。

实时荧光定量PCR仪：检测基因表达变化，在本检测中量化炎症相关基因（如iNOS）的mRNA水平，支持熔解曲线分析。

荧光显微镜：用于免疫荧光成像，在本检测中分析蛋白定位（如NF-κB核转位），结合CCD相机捕获图像。

细胞培养箱：维持标准培养环境，在本检测中控制温度（37°C）、湿度（95%）和CO2浓度（5%），确保细胞生长一致性。

离心机：分离细胞悬液，在本检测中用于细胞沉淀和洗涤步骤，转速范围100-1500×g。

微孔板洗涤器：自动化清洗ELISA板，在本检测中提高炎症因子检测效率，减少人为误差。

自动化液体处理系统：精确分配试剂，在本检测中处理化合物稀释和加样，通量高达384孔板。

生物安全柜：提供无菌操作空间，在本检测中防止细胞污染，符合生物安全二级标准。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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