实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR（Real-time Fluorescent Quantitative PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质检测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。该技术通过在PCR扩增过程中，利用荧光信号的变化对产物进行实时监测，从而实现对起始模板的定量分析。相比传统PCR技术，实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高、定量准确、无污染风险等显著优势，已广泛应用于生命科学研究、医学诊断、食品安全检测、转基因鉴定及病原微生物筛查等众多领域，是现代分子生物学检测的核心技术之一。

检测项目

新型冠状病毒核酸检测、乙型肝炎病毒DNA定量、丙型肝炎病毒RNA定量、人乳头瘤病毒分型、结核分枝杆菌DNA、EB病毒DNA定量、巨细胞病毒DNA定量、单纯疱疹病毒DNA、流感病毒RNA、非洲猪瘟病毒DNA、禽流感病毒RNA、猪瘟病毒RNA、布鲁氏菌DNA、沙门氏菌快速检测、金黄色葡萄球菌快速检测、大肠杆菌O157:H7快速检测、志贺氏菌快速检测、李斯特菌快速检测、转基因成分CaMV35S检测、转基因成分NOS检测、转基因玉米Bt11品系、转基因大豆GTS40-3-2品系、动物源性成分鉴定、肉类掺假鉴别、水稻转基因检测、小麦转基因检测、番茄转基因检测、棉花转基因检测、草莓转基因检测、烟草转基因检测

检测范围

临床血液样本、临床咽拭子样本、临床血清样本、临床血浆样本、临床尿液样本、临床脑脊液样本、临床胸腹水样本、临床组织活检样本、临床石蜡包埋组织、临床精液样本、临床羊水样本、产前诊断样本、新生儿足跟血、口腔黏膜细胞、动物全血样本、动物组织器官、动物淋巴结、动物脾脏、动物肾脏、动物肌肉组织、动物皮毛样本、动物饲料原料、食品肉制品、食品乳制品、食品饮料、食品调味品、食品食用油、食品速冻食品、食品生鲜果蔬、食品冷冻肉类、饮用水源、工业废水、环境土壤样本、环境空气微生物、环境水体沉积物、食品接触表面拭子

检测方法

TaqMan探针法：利用Taq酶的5'-3'外切酶活性，在PCR扩增过程中特异性切割与靶序列结合的荧光探针，使荧光基团与淬灭基团分离从而释放荧光信号，该方法具有极高的特异性，能够有效区分单碱基突变，适用于病原体检测、基因分型及SNP分析等对准确性要求较高的检测场景。

SYBR Green I染料法：使用SYBR Green I荧光染料与双链DNA小沟特异性结合，在扩增过程中随着双链DNA产物的增加，荧光信号强度同步增强，该方法成本较低且引物设计灵活，适用于高通量筛选、基因表达差异分析以及无需高特异性探针的常规核酸检测实验。

分子信标探针法：采用发夹结构的探针设计，探针两端分别标记荧光基团和淬灭基团，当探针与靶序列互补结合时发夹结构打开从而产生荧光，具有极低的背景信号和极高的信噪比，特别适用于等位基因鉴别、点突变检测以及需要高灵敏度检测的实时定量PCR实验。

蝎形探针法：将引物与探针合二为一的独特设计，探针部分在游离状态下呈发夹结构使荧光淬灭，延伸后探针与新生链结合释放荧光，由于结合反应是分子内作用，反应动力学更快，适用于快速检测、等位基因特异性扩增及需要极快检测速度的诊断场景。

LUX引物法：利用特定序列结构的荧光标记引物，在未掺入双链DNA时荧光被淬灭，延伸后荧光信号增强，无需专门设计探针即可实现实时检测，具有实验设计简便、成本低廉的优势，适用于基因表达分析、miRNA检测及大规模基因筛选等科研应用场景。

双探针杂交法：使用两个相邻的探针分别标记供体荧光基团和受体荧光基团，通过荧光共振能量转移（FRET）原理产生信号，只有当两个探针同时与靶序列结合时才发光，特异性极高，适用于染色体易位检测、基因重排分析及高精度分子诊断等复杂检测项目。

一步法RT-PCR：将逆转录和PCR扩增反应在同一管中连续进行，减少操作步骤和污染风险，特别适用于RNA病毒的快速检测，如流感病毒、新冠病毒、丙肝病毒等临床诊断，具有操作简便、检测时间短、自动化程度高的显著特点。

两步法RT-PCR：将逆转录反应和PCR扩增反应分开进行，可以先合成稳定的cDNA再进行多次PCR检测，灵活性高，适用于需要检测多个目标基因的实验、RNA表达谱分析、基因克隆以及需要优化反应条件的科研检测场景。

多重荧光PCR法：在同一反应体系中加入多对引物和多种不同荧光标记的探针，同时检测多个靶序列，通过不同荧光通道采集信号，极大提高了检测效率，适用于病原体联合筛查、耐药基因多靶标检测、转基因多基因同时鉴定等高通量检测需求。

数字PCR绝对定量法：通过微滴化技术将反应体系分割成数万个微小单元，通过泊松分布原理直接计算靶分子的绝对拷贝数，无需标准曲线即可实现绝对定量，适用于稀有突变检测、拷贝数变异分析、微量病原体定量及标准物质定值等高端检测领域。

检测仪器设备

ABI 7500实时荧光定量PCR仪：美国应用生物系统公司生产的主流机型，采用96孔设计，支持五色荧光检测通道，具备快速升降温模块和光学检测系统，广泛应用于临床诊断、药物研发、基因表达分析及转基因检测等领域，具有极高的灵敏度和数据重现性。

LightCycler 480实时PCR系统：罗氏公司研发的高性能定量PCR平台，采用独特的毛细管或96/384孔板设计，具备极高的升降温速率，支持熔解曲线分析，适用于高通量基因表达谱研究、SNP基因分型、病原体定量检测及药物基因组学研究等应用场景。

QuantStudio系列实时PCR系统：赛默飞世尔旗下高端产品线，涵盖5、6、7、12K等型号，支持开放通道和多重荧光检测，部分型号具备数字PCR功能，适用于生命科学研究、生物标志物发现、精准医疗诊断及农业分子育种等高端科研与应用领域。

Bio-Rad CFX96实时PCR检测系统：伯乐公司生产的高效检测平台，采用先进的光学检测技术，支持六通道同时检测，具备优异的温度均匀性和光学灵敏度，模块化设计便于维护升级，广泛应用于基础研究、食品安全检测、环境监测及分子诊断实验室。

Roche LightCycler纳米系统：罗氏公司推出的紧凑型快速PCR系统，采用创新的纳米微流控技术，反应体积小、升降温速度极快，可在极短时间内完成PCR扩增，适用于急诊检测、快速诊断及需要快速周转的临床分子检测场景。

Qiagen Rotor-Gene Q实时PCR仪：采用独特的离心转子设计，确保每个样品的光学检测条件完全一致，消除了边缘效应，具备卓越的温度均匀性，支持多种荧光通道，特别适用于高精度熔解曲线分析、病原体检测及基因表达定量分析。

博日LineGene系列荧光定量PCR仪：国产主流品牌代表产品，具备良好的性价比和稳定的检测性能，支持多通道荧光检测和熔解曲线分析，操作软件界面友好，广泛应用于各级疾控中心、医院检验科、科研院所及食品检验机构的常规核酸检测工作。

宏石SLAN-96S实时荧光定量PCR仪：国产高性能PCR仪器的典型代表，采用全固定光路设计，避免了机械运动带来的误差，具备优异的检测重复性和稳定性，支持多通道荧光检测，适用于临床诊断、食品安全、转基因检测及科学研究等领域的分子检测需求。

Bio-Rad QX200微滴式数字PCR系统：将样品微滴化处理后进行PCR扩增，通过检测微滴荧光信号实现绝对定量，无需标准曲线，灵敏度极高，适用于稀有等位基因检测、病毒载量精确测定、拷贝数变异分析及下一代测序文库定量等高端精准检测领域。

Stilla Technologies Naica系统：采用先进的晶体数字PCR技术，通过微腔室芯片实现样品分区，支持三色荧光检测和图像分析，具有直观的可视化检测结果，适用于液体活检、无创产前诊断、肿瘤突变检测及环境微生物定量分析等前沿分子诊断应用。

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