内质网应激标志物测定

检测项目

GRP78/BiP：葡萄糖调节蛋白78，是内质网腔内最主要的分子伴侣，其表达上调是内质网应激最经典和敏感的指标。

CHOP/GADD153：C/EBP同源蛋白，是内质网应激诱导的促凋亡转录因子，其表达水平反映应激的严重程度及凋亡通路激活。

XBP1剪接：X盒结合蛋白1的mRNA在IRE1α作用下发生非典型剪接，产生有活性的sXBP1，是IRE1通路激活的特异性标志。

ATF4：激活转录因子4，是PERK-eIF2α信号通路下游的关键转录因子，调控多种应激反应基因的表达。

磷酸化eIF2α：真核起始因子2α的Ser51位点磷酸化，由PERK等激酶催化，导致全局翻译抑制，是PERK通路激活的直接证据。

磷酸化IRE1α：内质网跨膜激酶IRE1α的自磷酸化激活，是其具有核酸内切酶活性、介导XBP1剪接的前提。

ATF6切割活化：全长ATF6在内质网应激后易位至高尔基体被蛋白酶切割，释放其胞质段并转运入核，其切割片段是ATF6通路激活的标志。

Caspase-12活性（小鼠）：位于内质网膜的Caspase-12（人类对应为Caspase-4）的活化，是内质网应激特异性凋亡途径的关键执行者。

钙连蛋白/钙网蛋白：内质网腔内钙结合蛋白，其表达变化可反映内质网钙稳态失衡及未折叠蛋白负荷状态。

EDEM等ERAD相关蛋白：内质网相关降解途径相关蛋白（如EDEM1）的表达上调，反映细胞增强错误折叠蛋白清除的能力。

检测范围

细胞培养上清液：可检测某些分泌型伴侣蛋白（如GRP94）或应激后释放的特定因子，用于无创监测。

细胞全蛋白提取物：最常用的样本类型，用于Western Blot、ELISA等检测细胞内应激标志蛋白的表达与修饰。

细胞核蛋白提取物：专门用于检测活化后转入细胞核的转录因子，如ATF4、sXBP1、切割后的ATF6片段等。

细胞总RNA：用于qRT-PCR分析各标志物（GRP78, CHOP, XBP1剪接变体等）在mRNA水平的表达变化。

组织匀浆液

组织匀浆液：从动物模型或临床样本中获取的组织，经匀浆后可用于评估在体情况下的内质网应激状态。

石蜡包埋组织切片：通过免疫组织化学或免疫荧光技术，在组织原位可视化特定标志物的表达与定位。

冰冻组织切片：更好地保存蛋白质抗原性和RNA完整性，适用于高要求的免疫组化、荧光及原位杂交检测。

血清/血浆样本

血清/血浆样本：探索循环中可溶性内质网应激标志物（如sXBP1）作为疾病生物标志物的潜力。

亚细胞组分（如微粒体）

亚细胞组分（如微粒体）：通过差速离心富集内质网膜组分，更精确地分析膜结合蛋白（如IRE1α, ATF6）的状态。

活细胞实时监测体系

活细胞实时监测体系：利用报告基因系统（如ERSE-荧光素酶）或荧光探针，在活细胞内动态监测内质网应激信号通路的活性。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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