氧化芪三酚细胞侵袭测试

检测项目

细胞侵袭能力定量分析：通过计数穿过基质胶模拟的基底膜的细胞数量，定量评估氧化芪三酚对细胞侵袭能力的抑制效果。

细胞活力同步检测：在进行侵袭实验的同时，通过MTT或CCK-8法检测药物处理后的细胞活力，排除细胞毒性对侵袭结果的干扰。

基质金属蛋白酶（MMPs）活性检测：评估氧化芪三酚对MMPs（如MMP-2， MMP-9）分泌及活性的影响，这是细胞侵袭的关键酶。

细胞伪足形成观察：利用高内涵成像或荧光染色，观察药物处理后细胞边缘伪足（侵袭相关结构）的数量和形态变化。

上皮-间质转化（EMT）标志物检测：通过Western Blot或免疫荧光，检测E-cadherin， N-cadherin， Vimentin等EMT相关蛋白的表达变化。

细胞粘附能力测试：检测经氧化芪三酚处理的细胞对基质成分（如纤连蛋白、胶原）的粘附能力变化。

细胞迁移能力对比测试：通常与侵袭实验平行进行划痕愈合实验或Transwell迁移实验，区分药物对迁移和侵袭的不同影响。

信号通路蛋白磷酸化分析：探究氧化芪三酚是否通过影响PI3K/AKT， MAPK/ERK， STAT3等信号通路来抑制侵袭。

基因表达谱分析：利用qRT-PCR或基因芯片技术，分析药物处理后侵袭相关基因（如MMPs， TIMPs， 整合素）的mRNA表达水平。

三维球体侵袭模型分析：在更接近体内环境的3D培养模型中，评估氧化芪三酚对多细胞球体向外侵袭的抑制作用。

检测范围

多种肿瘤细胞系：适用于高侵袭性的人乳腺癌细胞（如MDA-MB-231）、肝癌细胞（如HepG2）、结直肠癌细胞（如HCT-116）等。

不同浓度梯度药物处理：检测范围涵盖氧化芪三酚从亚毒性浓度到IC50浓度的一系列剂量，以确定其有效抑制浓度。

不同作用时间点：可检测药物处理12小时、24小时、48小时等不同时间点对细胞侵袭的动态影响。

联合用药效果评估：评估氧化芪三酚与常规化疗药物联用时，对细胞侵袭的协同或拮抗抑制作用。

不同基质胶类型：可使用Matrigel、胶原I、纤维蛋白等不同成分的基质胶模拟体内不同的微环境。

条件培养基的影响研究：研究经氧化芪三酚处理后的肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）条件培养基对肿瘤细胞侵袭的影响。

血管内皮细胞侵袭测试：应用于评估氧化芪三酚对肿瘤血管生成过程中内皮细胞管腔形成和侵袭的抑制作用。

炎症相关细胞模型：适用于研究在炎症因子（如TNF-α， IL-6）刺激下，氧化芪三酚对免疫细胞或上皮细胞侵袭行为的调节。

耐药细胞株的侵袭特性：检测氧化芪三酚对已产生化疗耐药性的肿瘤细胞株的侵袭能力是否具有抑制作用。

原代肿瘤细胞的体外测试：在具备条件的情况下，可应用于从患者肿瘤组织分离培养的原代细胞的侵袭能力评估。

检测方法

Transwell小室基质胶侵袭实验：经典方法，将基质胶铺于Transwell上室聚碳酸酯膜上，下室加趋化因子，计数下室细胞。

Boyden小室法：类似Transwell的原理，使用无涂层的膜进行迁移实验，或有涂层的膜进行侵袭实验。

划痕愈合实验（Wound Healing Assay）：简单直观的方法，通过划痕区域细胞的“愈合”速度间接评估细胞的迁移侵袭能力。

三维基质胶滴入侵袭分析：将细胞嵌入到3D基质胶滴中，定期显微观察并测量细胞从球体向外侵袭的距离和形态。

明胶酶谱法：通过SDS-PAGE电泳含有明胶的凝胶，检测培养基中MMP-2和MMP-9的活性变化。

荧光定量PCR（qRT-PCR）：定量分析经药物处理后，细胞中与侵袭相关的各种基因mRNA的表达差异。

蛋白质免疫印迹（Western Blot）：检测EMT标志蛋白、MMPs、信号通路关键蛋白等的表达量及磷酸化水平变化。

免疫荧光染色与共聚焦显微镜观察：对细胞内骨架蛋白（F-actin）、伪足结构或特定蛋白进行荧光标记和三维成像分析。

: 定量检测细胞培养上清中分泌型MMPs或其他可溶性因子的浓度。

: 结合自动化显微镜和图像分析软件，对Transwell下室细胞或3D模型进行高通量、多参数的定量分析。

检测仪器设备

超净工作台/生物安全柜: 提供无菌操作环境，用于所有涉及活细胞的实验步骤。

: 为细胞提供恒定的温度、湿度和CO2浓度，用于细胞的培养和药物处理。

: 用于日常观察细胞状态、计数以及初步观察划痕愈合、Transwell结果。

: 进行细胞侵袭和迁移实验的核心耗材装置。

: 用于读取MTT、CCK-8等细胞活力检测试剂的吸光度值，以及部分ELISA实验结果。

: 用于收集细胞、配制试剂等常规离心操作。

: 用于观察和分析免疫荧光染色样本，获取高分辨率图像。

: 用于Western Blot、明胶酶谱法等蛋白检测方法的成像和分析。

: 用于精确检测基因转录水平的表达变化。

: 实现高通量、自动化的细胞图像采集和多参数定量分析，大幅提升数据客观性和效率。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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