外泌体中提取rna检测

检测项目

外泌体浓度测定：采用纳米颗粒追踪技术，检测范围10⁶-10¹⁰ particles/mL，粒径分布70-150nm

总RNA提取量检测：紫外分光光度法测定，灵敏度0.1ng/μL，OD260/280比值1.8-2.0

miRNA定量分析：qRT-PCR检测，引物特异性≥98%，检测限10 copies/μL

lncRNA表达谱分析：高通量测序，覆盖长度>200nt，误差率<0.01%

mRNA完整性检测：RIN值评估，标准范围≥7.0，片段分布分析

外源污染物检测：ddPCR检测宿主基因组残留，阈值≤0.01%

小RNA文库构建：接头连接效率≥95%，片段筛选15-40nt

RNA甲基化分析：MeRIP-seq技术，分辨率单碱基，覆盖度30X

circRNA鉴定：RNase R耐受实验，环化位点验证准确率99%

外泌体表面标志物：WB检测CD63/CD81，灵敏度1μg蛋白样本

rRNA残留率：Agilent 2100分析，18S/28S比值≤5%

RNA降解产物：凝胶电泳检测，片段>200nt占比≥90%

检测范围

血清/血浆样本：处理体积200μL-1mL，抗凝剂干扰排除

细胞培养上清液：收集48-72h培养液，细胞数基准1×10⁶/mL

脑脊液样本：超速离心预处理，最低检测量500μL

尿液外泌体：晨尿标本处理，离心力20,000×g

肿瘤组织裂解液：组织重量≥50mg，胶原酶消化处理

乳汁外泌体：脱脂预处理，脂肪去除率>95%

腹水/胸水样本：细胞碎片清除，0.22μm过滤

植物外泌体样囊泡：叶片浸出液，PEG6000沉淀法

微生物来源囊泡：细菌培养上清，内毒素控制<0.05EU/mL

工程化外泌体：转染效率验证，报告基因检测

冻存复苏样本：液氮保存≤2年，冻融循环≤3次

石蜡包埋组织：脱蜡处理，RNA回收率≥30%

检测标准

ISO 21748:2017 分子诊断样本制备规范

ISO 20395:2018 外泌体分离技术指南

GB/T 37868-2019 RNA提取物质量要求

GB/T 34796-2017 核酸定量检测通则

ASTM E3337-22 外泌体表征标准流程

CLSI MM19-A2 微量RNA分析指南

ICH Q2(R1) 分析方法验证规范

MISEV2018 外泌体研究最低要求

ISO 15189:2022 医学实验室质量体系

GB/T 27417-2017 合格评定标准

检测仪器

纳米颗粒跟踪分析仪：测定外泌体粒径分布，检测精度±5nm

超速离心机：差速离心分离，最大RCF 150,000×g

实时荧光定量PCR仪：RNA表达定量，动态范围10¹-10¹⁰拷贝

高通量测序平台：RNA-Seq分析，通量100M reads/样本

生物分析仪：RNA完整性检测，灵敏度5pg/μL

紫外可见分光光度计：RNA纯度检测，波长范围190-800nm

自动化核酸提取仪：磁珠法提取，通量96样本/批次

冷冻透射电镜：外泌体形态学验证，分辨率0.1nm

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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