外泌体中提取rna检测
发布时间:2025-06-30
外泌体RNA检测是生物医学研究的关键技术,涉及外泌体分离、RNA提取及定量分析。检测要点包括样本完整性验证、提取效率控制、污染物排除及特定RNA分子(如miRNA、lncRNA)的精准定量。需严格遵循标准化流程确保数据可靠性,适用于疾病标志物筛选和细胞通讯机制研究。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
外泌体浓度测定:采用纳米颗粒追踪技术,检测范围10⁶-10¹⁰ particles/mL,粒径分布70-150nm
总RNA提取量检测:紫外分光光度法测定,灵敏度0.1ng/μL,OD260/280比值1.8-2.0
miRNA定量分析:qRT-PCR检测,引物特异性≥98%,检测限10 copies/μL
lncRNA表达谱分析:高通量测序,覆盖长度>200nt,误差率<0.01%
mRNA完整性检测:RIN值评估,标准范围≥7.0,片段分布分析
外源污染物检测:ddPCR检测宿主基因组残留,阈值≤0.01%
小RNA文库构建:接头连接效率≥95%,片段筛选15-40nt
RNA甲基化分析:MeRIP-seq技术,分辨率单碱基,覆盖度30X
circRNA鉴定:RNase R耐受实验,环化位点验证准确率99%
外泌体表面标志物:WB检测CD63/CD81,灵敏度1μg蛋白样本
rRNA残留率:Agilent 2100分析,18S/28S比值≤5%
RNA降解产物:凝胶电泳检测,片段>200nt占比≥90%
检测范围
血清/血浆样本:处理体积200μL-1mL,抗凝剂干扰排除
细胞培养上清液:收集48-72h培养液,细胞数基准1×10⁶/mL
脑脊液样本:超速离心预处理,最低检测量500μL
尿液外泌体:晨尿标本处理,离心力20,000×g
肿瘤组织裂解液:组织重量≥50mg,胶原酶消化处理
乳汁外泌体:脱脂预处理,脂肪去除率>95%
腹水/胸水样本:细胞碎片清除,0.22μm过滤
植物外泌体样囊泡:叶片浸出液,PEG6000沉淀法
微生物来源囊泡:细菌培养上清,内毒素控制<0.05EU/mL
工程化外泌体:转染效率验证,报告基因检测
冻存复苏样本:液氮保存≤2年,冻融循环≤3次
石蜡包埋组织:脱蜡处理,RNA回收率≥30%
检测标准
ISO 21748:2017 分子诊断样本制备规范
ISO 20395:2018 外泌体分离技术指南
GB/T 37868-2019 RNA提取物质量要求
GB/T 34796-2017 核酸定量检测通则
ASTM E3337-22 外泌体表征标准流程
CLSI MM19-A2 微量RNA分析指南
ICH Q2(R1) 分析方法验证规范
MISEV2018 外泌体研究最低要求
ISO 15189:2022 医学实验室质量体系
GB/T 27417-2017 合格评定标准
检测仪器
纳米颗粒跟踪分析仪:测定外泌体粒径分布,检测精度±5nm
超速离心机:差速离心分离,最大RCF 150,000×g
实时荧光定量PCR仪:RNA表达定量,动态范围10¹-10¹⁰拷贝
高通量测序平台:RNA-Seq分析,通量100M reads/样本
生物分析仪:RNA完整性检测,灵敏度5pg/μL
紫外可见分光光度计:RNA纯度检测,波长范围190-800nm
自动化核酸提取仪:磁珠法提取,通量96样本/批次
冷冻透射电镜:外泌体形态学验证,分辨率0.1nm
检测服务范围
1、指标检测:按国标、行标及其他规范方法检测
2、仪器共享:按仪器规范或用户提供的规范检测
3、主成分分析:对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。
4,样品前处理:对产品进行预处理后,进行样品前处理,包括样品的采集与保存,样品的提取与分离,样品的鉴定以及样品的初步分析,通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;
5、深度分析:根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测,然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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