小鼠肝脏提取rna检测
发布时间:2025-06-30
小鼠肝脏提取RNA检测在分子生物学研究中至关重要,聚焦于RNA纯度、浓度和完整性评估。专业检测要点包括核酸定量、杂质残留分析和降解控制,确保样本质量满足后续实验如转录组测序或RT-PCR的要求。标准操作涵盖样本处理、质控参数和污染预防。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
RNA浓度测定:通过紫外分光光度法量化总RNA含量,参数测量范围0-1000 ng/μL,精度±5%。
RNA纯度分析:评估A260/A280比值以检测蛋白质污染,理想值1.8-2.0,偏差允许±0.1。
RNA完整性检测:利用凝胶电泳分析28S和18S核糖体RNA条带,参数28S/18S比值≥1.8,RIN值(RNA Integrity Number)范围1-10。
DNA残留量测试:通过DNase消化后PCR扩增检测基因组DNA污染,限值<5%,灵敏度0.1 ng/μL。
RNase活性评估:采用降解实验监测样本中RNase污染,活性水平≤0.01 U/mg,检测限0.001 U。
杂质残留分析:测量酚、盐或溶剂残留,参数A260/A230比值2.0-2.2,最大允许杂质含量50 ppm。
产量计算:基于组织重量量化每毫克肝脏提取RNA量,参数标准范围1-50 μg/mg,重复性误差±10%。
降解程度评估:通过RT-PCR检测β-actin等管家基因表达稳定性,Ct值变异系数<5%。
分子量分布分析:使用毛细管电泳测定RNA片段大小,参数片段长度分布200-6000 nt,分辨率±10 nt。
荧光定量检测:应用SYBR Green等染料结合RNA进行高灵敏度定量,动态范围0.1-1000 ng/μL,检出限0.01 ng/μL。
pH值监测:保证提取缓冲液pH在7.0-8.0范围内,精度±0.1 pH单位。
渗透压控制:评估样本溶液渗透压,参数范围280-320 mOsm/kg,偏差±5%。
检测范围
C57BL/6品系小鼠肝脏:标准遗传背景模型,适用于基因表达基础研究。
BALB/c品系小鼠肝脏:免疫学研究常用样本,支持疫苗开发评估。
转基因小鼠肝脏:用于特定基因功能分析,如基因敲除或过表达模型。
疾病模型小鼠肝脏:包括肝纤维化、脂肪肝或肝癌样本,支持病理机制研究。
不同年龄阶段小鼠肝脏:比较新生、成年和老年样本,分析发育相关RNA变化。
处理条件样本:如药物暴露、毒素处理或营养干预后肝脏,用于药效评估。
新鲜与冻存肝脏:评估-80°C储存或液氮冻存对RNA稳定性的影响。
不同性别小鼠肝脏:研究性别差异在肝脏代谢中的RNA表达谱。
特定解剖区域:如肝左叶或右叶样本,用于空间异质性分析。
临床前研究样本:支持药物开发中的毒理学或药代动力学测试。
饮食干预模型:高脂或低碳水化合物饮食小鼠肝脏,用于代谢性疾病研究。
感染或炎症模型:如病毒或细菌感染后肝脏,评估免疫响应RNA变化。
检测标准
依据ISO 15189:2012规范医学实验室质量和能力要求,确保RNA检测过程标准化。
采用GB/T 22278-2008分子生物学检测通用指南,覆盖样本提取和质控流程。
遵循ASTM E1488-12核酸提取标准方法,指导污染控制和操作步骤。
应用ISO 20391-1:2018细胞计数和核酸定量标准,用于浓度和纯度测量。
执行GB/T 34796-2017 RNA完整性检测方法,规定电泳和RIN值计算规则。
参照ISO 9001:2015质量管理体系,保证整体检测流程可靠性。
依据GB/T 27417-2017实验室质量控制规范,实现数据可追溯性。
采用ISO/IEC 17025:2017检测校准实验室能力要求,规范仪器校准和维护。
遵循ASTM D4196-22标准指南,用于RNA纯度相关吸光度测量。
执行GB/T 30984-2014生物样本处理规范,确保样本存储和运输条件一致。
检测仪器
紫外分光光度计:测量RNA浓度和纯度,功能包括A260/A280比值计算,波长精度±1 nm。
微流体电泳系统:评估RNA完整性,功能通过芯片电泳生成RIN值,分辨率0.1 RIN单位。
荧光定量仪:高灵敏度RNA定量,功能使用荧光染料结合RNA,检测限0.01 ng/μL。
PCR扩增仪:检测DNA残留或降解程度,功能执行实时PCR扩增,温度控制精度±0.1°C。
凝胶电泳装置:分析RNA分子量分布,功能提供条带可视化,电压范围50-150 V。
毛细管电泳仪:精确测定RNA片段大小,功能实现高分辨率分离,尺寸误差±5 nt。
pH计:监控提取缓冲液酸碱度,功能测量pH值,精度±0.01单位。
渗透压计:评估样本溶液渗透压,功能确保等渗条件,测量范围0-1000 mOsm/kg。
离心机:用于样本沉淀和纯化,功能转速控制0-15000 rpm,时间设定精度±1秒。
恒温混匀仪:支持RNA提取步骤,功能温度调节范围4-100°C,混匀速度0-2000 rpm。
检测服务范围
1、指标检测:按国标、行标及其他规范方法检测
2、仪器共享:按仪器规范或用户提供的规范检测
3、主成分分析:对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。
4,样品前处理:对产品进行预处理后,进行样品前处理,包括样品的采集与保存,样品的提取与分离,样品的鉴定以及样品的初步分析,通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;
5、深度分析:根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测,然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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