非洲猪瘟病毒的检测

检测项目

荧光定量PCR检测：检测限达10拷贝/μL，Ct值判定范围15-38，采用TaqMan探针靶向B646L基因

等温扩增技术(LAMP)：反应温度65±0.5℃，扩增时间≤60min，灵敏度100拷贝/反应

酶联免疫吸附试验(ELISA)：检测波长450nm，P/N值≥2.1判定阳性，板内变异系数＜5%

病毒分离培养：使用原代猪肺泡巨噬细胞，培养温度37±1℃，CPE观察周期72-96h

免疫层析试纸检测：胶体金粒径40nm，目测判定时间10min，特异性＞98%

间接免疫荧光试验(IFA)：抗原片固定浓度10⁶TCID₅₀/mL，阳性判定荧光强度≥++

血细胞吸附试验：猪红细胞浓度0.4%，吸附时间30min，阳性判定标准≥50%细胞吸附

抗原捕获ELISA：包被抗体浓度5μg/mL，OD₄₉₀临界值0.42±0.05

核酸检测芯片：可同步检测ASFV基因型I-XXIV，杂交温度42±0.3℃

数字PCR定量：分区数20,000，绝对定量误差＜5%，动态范围10⁰-10⁶拷贝/μL

检测范围

生猪活体样本：口腔拭子/全血/血清，采样体积≥2mL，运输温度4-8℃

冷冻肉制品：肌肉组织/内脏器官，检测前处理需-20℃解冻

饲料及添加剂：植物源性饲料检测限1g/50g，脂肪含量≤15%

运输工具拭子：车厢表面采样面积10×10cm²，使用含抗生素的PBS缓冲液

屠宰场环境样本：污水需经0.22μm滤膜浓缩，地面拭子采样深度3mm

生物安全防护用品：防护服表面采样采用棉签浸润法，接触面积≥400cm²

动物源性蛋白粉：胃蛋白酶消化处理37℃/60min，检测灵敏度0.1%

冷冻精液样本：解冻后离心取沉淀，检测体积≥200μL

屠宰废弃物：需经121℃/15min灭活后检测，固液比1:9

野猪媒介样本：蜱虫研磨处理使用1mm钢珠，震荡频率30Hz/5min

检测标准

ISO/IEC 17025:2017《检测实验室能力通用要求》

GB/T 18648-2020《非洲猪瘟诊断技术》

OIE Terrestrial Manual 2023 Chapter 3.9.1

GB/T 19915.5-2005《猪水泡病和非洲猪瘟检疫技术规范》

SN/T 1559-2017《进出境动物检疫实验操作规范》

ISO 20395:2019《生物技术核酸定量方法要求》

GB 19489-2008《实验室生物安全通用要求》

NY/T 3231-2018《非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法》

ASTM E2888-19《病毒检测用标准物质制备指南》

GB/T 35901-2018《动物检疫样品保存技术规范》

检测仪器

实时荧光PCR仪：温度控制精度±0.1℃，支持多通道荧光采集，实现B646L/P72基因双重检测

全自动核酸提取仪：通量96样本/轮，磁珠回收率≥95%，交叉污染率＜0.1%

酶标分析仪：波长范围400-750nm，震荡速度200-1500rpm可调，支持四参数曲线拟合

生物安全柜：A2型，下降风速0.5±0.05m/s，HEPA过滤效率99.995%@0.3μm

冷冻离心机：最大RCF 30,000×g，温控范围-20℃至40℃，支持气溶胶密封转子

恒温金属浴：控温范围25-99℃，模块温度均匀性±0.3℃，支持0.2mL管直接加热

微滴式数字PCR系统：生成20,000微滴/样本，分区体积0.5-0.8nL，检测阈值自动优化

凝胶成像系统：CCD分辨率520万像素，动态范围4.8OD，支持自动曝光和背景校正

超低温冰箱：温度稳定性±3℃，-80℃保存病毒核酸样本

真空冷冻干燥机：冷阱温度-85℃，真空度≤0.1mbar，用于标准品冻干制备

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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