非洲猪瘟病毒的检测
发布时间:2025-06-30
非洲猪瘟病毒检测是防控疫情的关键环节,需通过专业分子生物学和血清学方法实现。核心检测要点包括病毒核酸特异性识别、抗体效价测定及样本前处理规范,确保结果符合国际动物卫生组织(OIE)标准要求。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
荧光定量PCR检测:检测限达10拷贝/μL,Ct值判定范围15-38,采用TaqMan探针靶向B646L基因
等温扩增技术(LAMP):反应温度65±0.5℃,扩增时间≤60min,灵敏度100拷贝/反应
酶联免疫吸附试验(ELISA):检测波长450nm,P/N值≥2.1判定阳性,板内变异系数<5%
病毒分离培养:使用原代猪肺泡巨噬细胞,培养温度37±1℃,CPE观察周期72-96h
免疫层析试纸检测:胶体金粒径40nm,目测判定时间10min,特异性>98%
间接免疫荧光试验(IFA):抗原片固定浓度10⁶TCID₅₀/mL,阳性判定荧光强度≥++
血细胞吸附试验:猪红细胞浓度0.4%,吸附时间30min,阳性判定标准≥50%细胞吸附
抗原捕获ELISA:包被抗体浓度5μg/mL,OD₄₉₀临界值0.42±0.05
核酸检测芯片:可同步检测ASFV基因型I-XXIV,杂交温度42±0.3℃
数字PCR定量:分区数20,000,绝对定量误差<5%,动态范围10⁰-10⁶拷贝/μL
检测范围
生猪活体样本:口腔拭子/全血/血清,采样体积≥2mL,运输温度4-8℃
冷冻肉制品:肌肉组织/内脏器官,检测前处理需-20℃解冻
饲料及添加剂:植物源性饲料检测限1g/50g,脂肪含量≤15%
运输工具拭子:车厢表面采样面积10×10cm²,使用含抗生素的PBS缓冲液
屠宰场环境样本:污水需经0.22μm滤膜浓缩,地面拭子采样深度3mm
生物安全防护用品:防护服表面采样采用棉签浸润法,接触面积≥400cm²
动物源性蛋白粉:胃蛋白酶消化处理37℃/60min,检测灵敏度0.1%
冷冻精液样本:解冻后离心取沉淀,检测体积≥200μL
屠宰废弃物:需经121℃/15min灭活后检测,固液比1:9
野猪媒介样本:蜱虫研磨处理使用1mm钢珠,震荡频率30Hz/5min
检测标准
ISO/IEC 17025:2017《检测实验室能力通用要求》
GB/T 18648-2020《非洲猪瘟诊断技术》
OIE Terrestrial Manual 2023 Chapter 3.9.1
GB/T 19915.5-2005《猪水泡病和非洲猪瘟检疫技术规范》
SN/T 1559-2017《进出境动物检疫实验操作规范》
ISO 20395:2019《生物技术核酸定量方法要求》
GB 19489-2008《实验室生物安全通用要求》
NY/T 3231-2018《非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法》
ASTM E2888-19《病毒检测用标准物质制备指南》
GB/T 35901-2018《动物检疫样品保存技术规范》
检测仪器
实时荧光PCR仪:温度控制精度±0.1℃,支持多通道荧光采集,实现B646L/P72基因双重检测
全自动核酸提取仪:通量96样本/轮,磁珠回收率≥95%,交叉污染率<0.1%
酶标分析仪:波长范围400-750nm,震荡速度200-1500rpm可调,支持四参数曲线拟合
生物安全柜:A2型,下降风速0.5±0.05m/s,HEPA过滤效率99.995%@0.3μm
冷冻离心机:最大RCF 30,000×g,温控范围-20℃至40℃,支持气溶胶密封转子
恒温金属浴:控温范围25-99℃,模块温度均匀性±0.3℃,支持0.2mL管直接加热
微滴式数字PCR系统:生成20,000微滴/样本,分区体积0.5-0.8nL,检测阈值自动优化
凝胶成像系统:CCD分辨率520万像素,动态范围4.8OD,支持自动曝光和背景校正
超低温冰箱:温度稳定性±3℃,-80℃保存病毒核酸样本
真空冷冻干燥机:冷阱温度-85℃,真空度≤0.1mbar,用于标准品冻干制备
检测服务范围
1、指标检测:按国标、行标及其他规范方法检测
2、仪器共享:按仪器规范或用户提供的规范检测
3、主成分分析:对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。
4,样品前处理:对产品进行预处理后,进行样品前处理,包括样品的采集与保存,样品的提取与分离,样品的鉴定以及样品的初步分析,通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;
5、深度分析:根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测,然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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