高通量测序样品准备检测
发布时间:2025-07-11
高通量测序样品准备检测是确保测序数据可靠性的关键步骤,涵盖样品质量控制、参数测量和标准遵循。核心要点包括DNA/RNA完整性评估、浓度精度控制、污染物筛查及仪器校准,以支持基因组、转录组等精准分析。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
DNA浓度测定:通过紫外吸收法,测量范围1-1000ng/μL,精度±5%,用于量化核酸含量。
RNA完整性值(RIN)评估:使用电泳或芯片技术,评分范围1-10,检测降解程度。
纯度检测:A260/A280比值分析,目标范围1.8-2.0,评估蛋白质污染。
片段大小分布:基于凝胶或毛细管电泳,分辨率±10bp,确保文库构建均匀性。
适配体连接效率:通过PCR扩增检测,效率范围70-100%,优化文库质量。
微生物污染筛查:qPCR方法检测细菌DNA,灵敏度0.1copy/μL。
GC含量分析:测序前校准,范围20-80%,精度±2%.
样品均一性测试:混匀度检测,变异系数≤5%,避免批次差异。
核酸提取回收率:计算输入输出比,标准回收率≥90%.
荧光定量检测:染料标记评估,动态范围1-1000RFU,精度±3%.
存储稳定性测试:-80°C条件下监测降解,时间跨度0-12个月。
PCR偏差控制:扩增效率测量,目标值90-110%,减少偏好性。
离子浓度检测:电导率法,范围0.1-100mM,确保缓冲液兼容。
pH值测定:电极法,目标7.0-8.0,精度±0.1。
酶活性验证:底物反应检测,活性单位≥80%,保证酶切效率。
检测范围
血液样本:用于全基因组测序,涉及抗凝处理和DNA提取。
组织样本:如肿瘤或正常组织,需匀浆和纯化步骤。
微生物样本:环境或临床分离物,针对16SrRNA测序。
植物材料:作物叶片或种子,强调多糖去除。
法医样本:微量DNA来源,如毛发或唾液,需高灵敏度处理。
细胞培养物:哺乳动物或昆虫细胞,监测细胞裂解效率。
病毒RNA样本:如呼吸道病毒,用于宏基因组分析。
古DNA样本:考古骨骼或牙齿,涉及脱钙和去污染。
合成寡核苷酸:文库构建质量控制,验证序列准确性。
粪便样本:肠道微生物组研究,需均质化和抑制剂移除。
水样:环境水微生物检测,过滤浓缩后提取。
唾液样本:非侵入性采集,用于SNP分析。
培养细胞上清:外泌体RNA提取,支持液体活检。
土壤样本:环境DNA分析,强调腐殖酸去除。
食品基质:如肉类或谷物,检测转基因成分。
检测标准
ISO20395:2018生物样品质量控制通用要求。
GB/T37871-2019核酸提取纯化方法规范。
ASTME3130-18测序样品准备性能评估。
ISO17025检测和校准实验室能力通用准则。
GB/T30988-2014DNA浓度测定分光光度法。
ISO20184-1:2018分子体外诊断样品处理。
GB/T35825-2018RNA完整性检测技术条件。
ASTME2554-18微生物污染筛查标准。
ISO22174:2005食品微生物分子检测样品制备。
GB/T40189-2021高通量测序文库构建规范。
ISO17205:2017环境样品DNA提取指南。
GB/T36082-2018法医DNA样品保存要求。
检测仪器
分光光度计:测量核酸浓度和纯度,波长范围200-800nm。
荧光计:检测染料标记样品,灵敏度0.1ng/μL。
凝胶成像系统:分析DNA片段大小,分辨率达1bp。
自动化核酸提取仪:高效处理多样本,通量96孔/批次。
微流控芯片系统:用于小体积样品,集成提取和定量。
毛细管电泳仪:评估片段分布,精度±2bp。
实时定量PCR仪:验证污染和效率,动态范围10⁶。
离心机:样品沉淀和纯化,转速范围500-15000rpm。
恒温混匀器:确保均一性,温度控制±0.5°C。
pH计:校准缓冲溶液,精度±0.01。
检测服务范围
1、指标检测:按国标、行标及其他规范方法检测
2、仪器共享:按仪器规范或用户提供的规范检测
3、主成分分析:对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。
4,样品前处理:对产品进行预处理后,进行样品前处理,包括样品的采集与保存,样品的提取与分离,样品的鉴定以及样品的初步分析,通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;
5、深度分析:根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测,然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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