伪狂犬病毒检测
发布时间:2025-04-24
伪狂犬病毒(PseudorabiesVirus,PRV)是危害畜牧业的甲型疱疹病毒科病原体,其检测需结合病原学、血清学及分子生物学技术。本文系统阐述病毒分离培养、ELISA抗体筛查、实时荧光定量PCR等核心方法,明确组织样本、血液及环境介质的采集规范,强调实验室生物安全与质量控制要点,为疫病监测提供标准化技术参考。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
伪狂犬病毒检测涵盖病原学诊断、血清学筛查及分子生物学鉴定三大类目。病原学检测包括病毒分离培养与抗原定位分析;血清学检测聚焦IgG/IgM抗体效价测定及中和抗体滴度评估;分子生物学检测以gB/gE基因特异性扩增为核心。复合型诊断项目包含病理组织切片染色观察与跨物种传播风险评估。
检测范围
适用于猪科动物(含家猪/野猪)的临床样本(脑组织/扁桃体/肺脏)、血液/血清样本及养殖环境拭子。扩展检测对象包括牛/羊/犬等偶蹄类接触动物。覆盖急性感染期病毒载量测定、潜伏感染状态监测及疫苗免疫效果评价三大应用场景。跨境运输活体检疫与屠宰场肉品安全检验纳入强制检测范畴。
检测方法
病毒分离培养法:采用PK-15细胞系接种处理后的组织匀浆液,通过典型细胞病变效应(CPE)观察与免疫荧光染色确认病毒增殖。
ELISA抗体检测:使用预包被gB/gE重组蛋白的96孔板进行间接法/阻断法双模式筛查,OD450nm值判读阈值设定为阴性对照均值2.1倍。
实时荧光定量PCR:针对UL44基因保守区设计TaqMan探针(FAM标记),反应体系含dNTPs 0.2mM/MgCl₂ 3mM/引物0.4μM/探针0.2μM,循环条件:95℃预变性10min→95℃15s/60℃1min(40循环)。
血清中和试验:固定病毒-稀释血清法测定50%中和效价(SN50),使用100 TCID₅₀病毒量接种Vero细胞板。
病理组织学检查:苏木精-伊红染色观察脑干神经元核内包涵体及肝脏灶性坏死病变。
检测仪器
生物安全三级实验室设备组:二级生物安全柜(Class II A2型)、CO₂细胞培养箱(±0.1℃精度)、倒置相差显微镜。
分子生物学平台:实时荧光定量PCR仪(支持TaqMan/Hydrolysis探针)、核酸提取工作站(磁珠法通量≥96样/批次)。
血清学分析系统:全自动酶标仪(双波长校正功能)、微量移液器(0.1-1000μL量程)。
辅助设备组:高压灭菌器(≥121℃/30min验证周期)、超低温冰箱(-80℃样本存储)、高速冷冻离心机(最大RCF 20,000×g)。
检测服务范围
1、指标检测:按国标、行标及其他规范方法检测
2、仪器共享:按仪器规范或用户提供的规范检测
3、主成分分析:对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。
4,样品前处理:对产品进行预处理后,进行样品前处理,包括样品的采集与保存,样品的提取与分离,样品的鉴定以及样品的初步分析,通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;
5、深度分析:根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测,然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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