柱式rna提取检测
发布时间:2025-07-01
柱式RNA提取检测是分子生物学研究中的关键技术,基于硅胶膜吸附原理实现RNA高效纯化。检测核心涵盖RNA完整性、纯度、浓度及污染物控制,需严格遵循操作规范与标准流程,确保下游基因表达分析可靠性。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
RNA浓度:紫外分光光度法测定A260值,线性范围2ng/μL~5000ng/μL
A260/A280比值:评估蛋白质污染,合格标准1.8~2.1
A260/A230比值:检测有机溶剂残留,阈值需≥2.0
RNA完整性值:电泳法测定28S/18S核糖体RNA比例,合格值≥1.5
基因组DNA残留:DNase消化后PCR检测,扩增片段≤100bp
RNA酶活性:体外转录模板降解实验,降解率需<5%
回收率:内参基因添加法计算,要求≥90%
片段分布:毛细管电泳分析,主峰位置18S~28S区间
抑制剂检测:qPCR扩增效率评估,CT值偏移≤1周期
批次一致性:10次重复提取CV值≤8%
检测范围
动物组织样本:肝脏/脑组织等高脂质样本需优化裂解方案
植物材料:含多糖多酚样本需附加CTAB纯化步骤
血液标本:全血RNA提取需专用抗凝剂预处理
培养细胞:贴壁细胞裂解需控制胰酶消化时间
微生物样品:革兰氏阳性菌需加强溶菌酶处理
法医检材:陈旧样本需延长蛋白酶K消化至24小时
FFPE组织:石蜡包埋样本需二甲苯脱蜡及高温解交联
体液样本:唾液/尿液需离心富集细胞组分
环境样本:土壤微生物RNA提取需珠磨破碎
病毒颗粒:需DNase I处理去除宿主DNA干扰
检测标准
ISO 20395:2018 生物技术-核酸定量检测通用要求
GB/T 34796-2017 核酸提取纯化试剂盒质量评价技术规范
CLSI MM13-A 分子诊断标本制备标准
ASTM E2651-19 基因芯片分析用RNA质量控制指南
GB/T 37872-2019 高通量测序样本预处理规范
ISO 20184-3:2020 冷冻组织样本RNA提取流程
EP 7.0 药典通则 核酸类产品检测方法
YY/T 1256-2020 体外诊断试剂RNA保存液行业标准
ISO 20166-2:2018 福尔马林固定组织RNA分析规范
GB/T 40181-2021 高通量转录组测序样本质量要求
检测仪器
Nanodrop One超微量分光光度计:1μL样本检测浓度与纯度,检测波长190~840nm
Agilent 4200 TapeStation系统:自动化电泳分析RNA完整性值,分辨率6~6000nt
Qubit 4.0荧光计:高灵敏度RNA定量,检测限0.1pg/μL
Thermo KingFisher Flex磁珠纯化仪:96通道自动提取,通量200样本/小时
Bio-Rad CFX96 qPCR仪:检测基因组DNA残留,灵敏度5拷贝/μL
Eppendorf 5430离心机:高速低温离心防止RNA降解,最大转速30,000rpm
Labconco真空浓缩仪:乙醇沉淀后干燥RNA沉淀,控温范围4~60℃
Covaris S220超声破碎仪:组织样本均质化处理,频率峰值500kHz
Beckman Coulter Biomek 4000自动化工作站:集成移液与柱纯化操作
Thermo Pico 17微量离心机:快速离心吸附柱,转速12,000rpm
检测服务范围
1、指标检测:按国标、行标及其他规范方法检测
2、仪器共享:按仪器规范或用户提供的规范检测
3、主成分分析:对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。
4,样品前处理:对产品进行预处理后,进行样品前处理,包括样品的采集与保存,样品的提取与分离,样品的鉴定以及样品的初步分析,通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;
5、深度分析:根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测,然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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