制药微生物检测

检测项目

无菌检查：采用薄膜过滤法或直接接种法，依据药典要求培养14天，检测需氧菌、厌氧菌及霉菌存活情况。

微生物限度检查：包含需氧菌总数（35℃培养72h）、霉菌酵母菌总数（25℃培养5d）及控制菌检查（大肠埃希菌等7类病原菌）。

细菌内毒素检测：应用鲎试剂凝胶法或动态显色法，检测限0.001-5EU/mL，符合注射剂产品限量要求。

无菌工艺模拟试验：使用TSB/FTM培养基灌装≥5000单位，培养14-21天，验证无菌生产工艺可靠性。

抑菌效力检查：挑战试验采用5类标准菌株（金葡菌、铜绿假单胞菌等），接种量10⁵-10⁶CFU/mL，评估防腐体系有效性。

支原体检测：培养法28天观察Vero细胞病变，PCR法检测16S rRNA基因，灵敏度≤10CFU/mL。

生物负荷监测：采用膜过滤法结合R2A培养基，30-35℃培养5d，监控原料药及中间体微生物水平。

包装密封性验证：微生物侵入法使用缺陷菌（缺陷短波单胞菌ATCC51442），挑战压力0.5-2.0bar。

灭菌验证：生物指示剂（嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC7953）D值1.5-3.0min，存活曲线法确认灭菌柜性能。

环境监测：沉降菌（φ90mm碟4h）、浮游菌（1000L/min采样）、表面微生物（25cm²接触碟）动态监控。

真菌毒素检测：HPLC-MS/MS法测定黄曲霉毒素B1（检出限0.1ppb）、赭曲霉毒素A（定量限0.5ppb）。

病毒清除验证：使用ΦX174（24nm）、PR772（70nm）等指示病毒，评估清除系数≥4log10。

检测范围

注射制剂：包括水针剂、粉针剂、输液产品等无菌制剂，重点监控内毒素水平及无菌保证。

生物制品：疫苗、血液制品、重组蛋白类药物需进行支原体、外源病毒因子等专项检测。

非无菌制剂：口服溶液、片剂、胶囊等需控制微生物限度（需氧菌≤10³CFU/g）。

原料药及辅料：药用淀粉、乳糖等辅料需检测沙门菌（25g样品不得检出）。

药用包装材料：注射器、胶塞、西林瓶等需进行无菌屏障性能验证及浸出物微生物检测。

医疗器械：植入器械（类目Ⅲ）须达到无菌要求，导管类产品额外检测细菌黏附量。

纯化水系统：微生物警戒限≤50CFU/mL，行动限≤100CFU/mL，每周动态监测。

制药环境：A级区浮游菌≤1CFU/m³，沉降菌≤1CFU/4h，表面微生物≤1CFU/碟。

中药制剂：丸剂、膏剂等需特别控制耐热菌（如芽孢杆菌属）及真菌毒素污染。

细胞治疗产品：干细胞制剂需进行无菌、支原体、分枝杆菌及内外源病毒全面筛查。

眼用制剂：除无菌要求外，需验证铜绿假单胞菌（ATCC9027）等特定病原体清除能力。

动物源性材料：胰酶、明胶等需检测猪细小病毒（PPV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）。

检测标准

中国药典2020版通则1101无菌检查法、1105微生物计数法、1106控制菌检查法及1107支原体检查法。

USP<71>Sterility Tests、<61>Microbial Examination of Nonsterile Products及<85>Bacterial Endotoxins Test。

EP 2.6.1 Sterility、2.6.12 Microbiological Examination of Non-sterile Products及2.6.14 Bacterial Endotoxins。

ISO 11737-1灭菌微生物学方法-产品上微生物总数测定，ISO 13408-1无菌工艺规范要求。

GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分：生物学试验方法。

PIC/S PI 007-6 无菌产品生产验证指南，涵盖培养基模拟灌装试验要求。

FDA Guidance for Industry: Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing。

ISO 14644-1 洁净室环境分级标准，规定悬浮粒子及微生物监测限值。

GB 50457-2019 医药工业洁净厂房设计标准，附录B环境监测要求。

ICH Q5A(R1) 来源于人或动物细胞系生物技术产品的病毒安全性评价。

检测仪器

全自动无菌检测系统：集成薄膜过滤、培养基灌装及图像识别功能，可同时处理120个样品，符合21CFR Part11数据完整性要求。

微生物快速检测仪：采用ATP生物发光技术，灵敏度0.1fmol ATP，15秒完成表面清洁度验证。

激光诱导荧光菌落计数仪：635nm激光扫描，自动识别0.5-5mm菌落，计数精度±2%。

全自动内毒素检测系统：动态显色法检测范围0.001-100EU/mL，96孔板并行处理能力。

微生物鉴定质谱仪：MALDI-TOF技术，数据库含＞3000种微生物，鉴定准确率≥95%。

实时荧光定量PCR仪：支持TaqMan探针法，检测限达10拷贝/反应，完成支原体检测仅需2小时。

浮游菌采样器：1000L/min大流量采样，六通道安德森撞击原理，可分级捕获0.65-7.0μm粒子。

隔离器环境监测系统：在线粒子计数器（0.5/5.0μm双通道）集成微生物采样头，每4分钟自动记录。

程序控温培养箱：温度范围-10℃至80℃，均一性±0.5℃，支持三级权限管理及电子审计追踪。

全自动灭菌指示剂培养器：同时培养160支生物指示剂，自动判读荧光信号，阳性检出率100%。

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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