NF-κB核转位免疫荧光检测

检测项目

核转位比率检测：计算NF-κB阳性细胞核的比例，精度控制在±0.5%误差范围内

荧光强度量化：测量目标蛋白荧光信号平均强度，分辨率达0.1单位

背景校正分析：减去非特异性荧光背景噪声，误差范围±2%

核轮廓清晰度评估：确保细胞核染色边界清晰，合格阈值≥95%可视性

抗体交叉反应测试：验证抗体专一性，排除其他蛋白干扰，灵敏度0.01μg/mL

细胞固定质量检测：评估甲醛固定效果，渗透时间控制在10-15分钟

图像采集参数优化：设定曝光时间50-200ms，放大倍数40×-100×

统计分析处理：应用t-test或ANOVA算法，置信水平p<0.05

阳性对照设置：使用TNF-α刺激样品作为参考，响应率≥90%

阴性对照实施：采用未处理细胞对比，背景信号阈值≤5%

检测灵敏度测定：识别最低NF-κB浓度，检出限0.1ng/mL

重复性验证试验：进行三次独立实验，变异系数CV≤3%

细胞活力监控：确保样品存活率>85%，使用台盼蓝染色法

染色均匀性检查：评估抗体分布一致性，合格标准变异<5%

信号衰减校正：补偿荧光漂白效应，时间窗口≤30分钟

检测范围

细胞培养物：如HEK293或RAW264.7细胞系，用于基础分子机制研究

组织切片样本：肿瘤或炎症组织活检，评估病理状态下NF-κB活化

原代免疫细胞：外周血单核细胞分离物，分析免疫应答过程

动物模型组织：小鼠肝脏或脾脏切片，研究体内信号传导

体外转染系统：基因过表达或敲除细胞模型，探索通路调控

临床病理样本：患者炎症疾病活检，辅助诊断和治疗监测

药物筛选平台：高通量药物测试模型，评估抑制剂或激活剂效果

基因编辑研究：CRISPR-Cas9编辑细胞比较，验证突变影响

病毒感染模型：如流感病毒侵染细胞，分析宿主防御机制

炎症疾病模型：类风湿关节炎细胞培养，研究病理机制

癌症研究样本：肿瘤细胞株如HeLa，探究NF-κB在癌变中的作用

干细胞分化研究：诱导多能干细胞衍生模型，监测分化过程

毒性测试应用：环境毒素或药物处理后细胞，评估细胞应激反应

衰老研究模型：老化细胞样本，分析年龄相关炎症变化

微生物感染分析：细菌如LPS刺激巨噬细胞，研究免疫应答

检测标准

依据ISO 19001:2016显微镜成像规范进行图像采集

遵循GB/T 16886.10-2017生物相容性测试方法学要求

采用ASTM E2809-21荧光定量分析标准流程

参考ISO 15189:2022医学实验室质量管理体系

执行GB/T 37861-2019细胞检测技术通用规范

遵守ISO/IEC 17025实验室能力认可准则

应用GB/T 33237-2016细胞荧光染色操作指南

依据ISO 13485医疗器械质量管理标准

参考GB/T 27417-2017实验数据处理规范

采用ASTM F2721-09细胞培养标准方法

检测仪器

倒置荧光显微镜：配备DAPI/FITC/TRITC滤镜，用于NF-κB定位成像

激光共聚焦显微镜：提供三维断层扫描功能，分辨率达0.2μm

数字CCD相机系统：捕获高分辨率荧光图像，灵敏度16bit

图像分析软件：集成定量模块处理荧光信号强度

细胞培养箱：维持37°C及5% CO₂环境，确保样品活性

离心机：用于细胞沉淀处理，转速范围100-1500rpm

显微镜载玻片处理器：自动化制备样品，减少人为误差

荧光分光光度计：校准抗体浓度，波长精度±1nm

低温存储设备：保存抗体试剂在-20°C环境

移液系统：精确加样，精度误差≤0.1μL

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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