修饰化蛋白质组学检测

检测项目

磷酸化位点鉴定：采用TiO2/MOAC富集策略，LC-MS/MS分辨率达140,000@m/z 200，定位精度±0.01Da

N-糖基化全景分析：PNGase F酶切释放聚糖，HILIC色谱分离，可检测≥10 fmol糖型，解析HexNAc-Hex-NeuAc组合

泛素化定量检测：基于K-ε-GG抗体富集，TMT标记定量，动态范围横跨4个数量级

乙酰化位点验证：抗乙酰赖氨酸免疫沉淀，碰撞能量优化在28±5 eV，碎片离子覆盖率达90%

甲基化水平检测：SCX分级分离，MRM模式定量，定量下限LOQ=0.5 fmol/μg

SUMO化修饰分析：2%SDS裂解体系预处理，免疫印迹确认分子量偏移≥15 kDa

硝基化酪氨酸定位：ASC化学还原法结合MALDI-TOF/TOF，质量误差≤3 ppm

脂化修饰表征：氯仿-甲醇萃取富集，中性丢失扫描触发MS3，检测C14:0-C20:4链长变异

O-GlcNAc糖基化检测：β-消除迈克尔加成，电子转移解离ETD碎片保留修饰信息

ADP核糖基化解析：宏结构域亲和纯化，Orbitrap检测特征质量位移541.061 Da

瓜氨酸化定量：PAD酶抑制剂对照，13C6精氨酸代谢标记，变异系数CV<8%

谷胱甘肽化检测：还原烷基化阻断游离巯基，GST pull-down联合MRM验证

检测范围

抗体药物糖基化修饰：IgG1 Fc段N297糖型分析，涉及G0F/G1F/G2F等影响ADCC活性

肿瘤标志物磷酸化：EGFR/L858R突变体Tyr1068磷酸化水平监测，样本量≥106细胞

神经退行性疾病样本：Tau蛋白Ser202/Thr205位点磷酸化定量，脑脊液需求200μL

疫苗载体蛋白修饰：SARS-CoV-2 S蛋白K986P/V987P脯氨酸化验证

农业转基因产物：Bt毒素蛋白Cry1Ac Lys94乙酰化修饰安全性评估

微生物耐药机制：MRSA菌株PBP2a Ser403磷酸化与β-内酰胺类耐药关联性

环境毒理研究：双酚A暴露诱导组蛋白H3K27三甲基化变化检测

法医物证溯源：毛发角蛋白S-carboxymethylcysteine修饰时序分析

海洋生物活性肽：海葵毒素Kv1.3钾通道调节肽C端酰胺化鉴定

细胞治疗产品：iPSC分化心肌细胞肌钙蛋白I Ser23/24磷酸化成熟度评价

食品过敏原修饰：β-乳球蛋白Lys47糖基化产物致敏性消减验证

工业酶制剂：纤维素酶Aspergillus niger糖型Man5GlcNAc2占比控制

检测标准

ISO 21386:2020 质谱法蛋白质修饰定量分析通用要求

ASTM E3060-16 磷酸化肽段LC-MS/MS检测标准指南

GB/T 38165-2019 人血清糖蛋白质组学检测规范

EP 2.2.66 欧洲药典生物制品糖基化分析方法

ICH Q6B 生物技术产品质量表征国际协调标准

GB/T 40445-2021 蛋白质组学数据质控规范

ISO 22176:2021 临床样本磷酸化蛋白质组检测流程

USP<1058> 分析仪器确认章节质谱系统验证

GB/T 42217-2022 纳米材料-蛋白质冠修饰检测指南

ISO 20914:2019 医学实验室测量不确定度评定

检测仪器

四极杆-静电场轨道阱质谱仪：QE-HFX系统配备FAIMS Pro离子淌度接口，分辨率480,000@m/z 200，实现同分异构体分离

纳升液相色谱系统：EASY-nLC 1200配备75μm ID毛细管柱，梯度延迟体积<1μL，保障PTM肽段分离重现性

激光解吸飞行时间质谱：MALDI-TOF/TOF配置2 kHz Smartbeam激光器，成像分辨率5μm，用于组织切片修饰定位

表面等离子体共振仪：Biacore 8K系统多通道流动池，温度控制±0.01℃，实时监测修饰依赖的分子互作动力学

毛细管电泳质谱联用：SCIEX CESI 8000系统运行电压30 kV，分离效率>500,000 N/m，适于酸性修饰分析

高分辨离子淌度谱：timsTOF Pro 2配备PASEF技术，碰撞截面测量精度CCS值RSD<0.3%

差分迁移谱：SELECT SERIES Cyclic IMS环形离子阱，分辨率>750，分离α/β型糖基化异构体

超高场核磁共振：AVANCE NEO 1.2 GHz谱仪配备TCI超低温探头，检测限达nmol级翻译后修饰

检测服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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