修饰化蛋白质组学检测
发布时间:2025-06-30
修饰化蛋白质组学检测聚焦蛋白质翻译后修饰的定性与定量分析,涵盖磷酸化、糖基化、乙酰化等关键修饰类型。核心检测要点包括修饰位点精准定位、修饰动态变化监测、修饰水平绝对定量及功能关联性解析,需满足高灵敏度、高分辨率和低假阳性率的技术要求。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
磷酸化位点鉴定:采用TiO2/MOAC富集策略,LC-MS/MS分辨率达140,000@m/z 200,定位精度±0.01Da
N-糖基化全景分析:PNGase F酶切释放聚糖,HILIC色谱分离,可检测≥10 fmol糖型,解析HexNAc-Hex-NeuAc组合
泛素化定量检测:基于K-ε-GG抗体富集,TMT标记定量,动态范围横跨4个数量级
乙酰化位点验证:抗乙酰赖氨酸免疫沉淀,碰撞能量优化在28±5 eV,碎片离子覆盖率达90%
甲基化水平检测:SCX分级分离,MRM模式定量,定量下限LOQ=0.5 fmol/μg
SUMO化修饰分析:2%SDS裂解体系预处理,免疫印迹确认分子量偏移≥15 kDa
硝基化酪氨酸定位:ASC化学还原法结合MALDI-TOF/TOF,质量误差≤3 ppm
脂化修饰表征:氯仿-甲醇萃取富集,中性丢失扫描触发MS3,检测C14:0-C20:4链长变异
O-GlcNAc糖基化检测:β-消除迈克尔加成,电子转移解离ETD碎片保留修饰信息
ADP核糖基化解析:宏结构域亲和纯化,Orbitrap检测特征质量位移541.061 Da
瓜氨酸化定量:PAD酶抑制剂对照,13C6精氨酸代谢标记,变异系数CV<8%
谷胱甘肽化检测:还原烷基化阻断游离巯基,GST pull-down联合MRM验证
检测范围
抗体药物糖基化修饰:IgG1 Fc段N297糖型分析,涉及G0F/G1F/G2F等影响ADCC活性
肿瘤标志物磷酸化:EGFR/L858R突变体Tyr1068磷酸化水平监测,样本量≥106细胞
神经退行性疾病样本:Tau蛋白Ser202/Thr205位点磷酸化定量,脑脊液需求200μL
疫苗载体蛋白修饰:SARS-CoV-2 S蛋白K986P/V987P脯氨酸化验证
农业转基因产物:Bt毒素蛋白Cry1Ac Lys94乙酰化修饰安全性评估
微生物耐药机制:MRSA菌株PBP2a Ser403磷酸化与β-内酰胺类耐药关联性
环境毒理研究:双酚A暴露诱导组蛋白H3K27三甲基化变化检测
法医物证溯源:毛发角蛋白S-carboxymethylcysteine修饰时序分析
海洋生物活性肽:海葵毒素Kv1.3钾通道调节肽C端酰胺化鉴定
细胞治疗产品:iPSC分化心肌细胞肌钙蛋白I Ser23/24磷酸化成熟度评价
食品过敏原修饰:β-乳球蛋白Lys47糖基化产物致敏性消减验证
工业酶制剂:纤维素酶Aspergillus niger糖型Man5GlcNAc2占比控制
检测标准
ISO 21386:2020 质谱法蛋白质修饰定量分析通用要求
ASTM E3060-16 磷酸化肽段LC-MS/MS检测标准指南
GB/T 38165-2019 人血清糖蛋白质组学检测规范
EP 2.2.66 欧洲药典生物制品糖基化分析方法
ICH Q6B 生物技术产品质量表征国际协调标准
GB/T 40445-2021 蛋白质组学数据质控规范
ISO 22176:2021 临床样本磷酸化蛋白质组检测流程
USP<1058> 分析仪器确认章节质谱系统验证
GB/T 42217-2022 纳米材料-蛋白质冠修饰检测指南
ISO 20914:2019 医学实验室测量不确定度评定
检测仪器
四极杆-静电场轨道阱质谱仪:QE-HFX系统配备FAIMS Pro离子淌度接口,分辨率480,000@m/z 200,实现同分异构体分离
纳升液相色谱系统:EASY-nLC 1200配备75μm ID毛细管柱,梯度延迟体积<1μL,保障PTM肽段分离重现性
激光解吸飞行时间质谱:MALDI-TOF/TOF配置2 kHz Smartbeam激光器,成像分辨率5μm,用于组织切片修饰定位
表面等离子体共振仪:Biacore 8K系统多通道流动池,温度控制±0.01℃,实时监测修饰依赖的分子互作动力学
毛细管电泳质谱联用:SCIEX CESI 8000系统运行电压30 kV,分离效率>500,000 N/m,适于酸性修饰分析
高分辨离子淌度谱:timsTOF Pro 2配备PASEF技术,碰撞截面测量精度CCS值RSD<0.3%
差分迁移谱:SELECT SERIES Cyclic IMS环形离子阱,分辨率>750,分离α/β型糖基化异构体
超高场核磁共振:AVANCE NEO 1.2 GHz谱仪配备TCI超低温探头,检测限达nmol级翻译后修饰
检测服务范围
1、指标检测:按国标、行标及其他规范方法检测
2、仪器共享:按仪器规范或用户提供的规范检测
3、主成分分析:对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。
4,样品前处理:对产品进行预处理后,进行样品前处理,包括样品的采集与保存,样品的提取与分离,样品的鉴定以及样品的初步分析,通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;
5、深度分析:根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测,然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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