dia定量蛋白质组学检测
发布时间:2025-06-30
DIA定量蛋白质组学检测是一种基于质谱的高通量蛋白质分析方法,专注于数据独立采集模式下的精确蛋白质定量。该技术强调全面样品覆盖、高重现性及低偏差检测,关键要点包括样本前处理优化、色谱分离效率、质谱数据采集准确性、生物信息学算法验证。适用于生物医学研究中蛋白质表达谱、翻译后修饰谱及生物标志物筛选。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
蛋白质定量:测量绝对或相对蛋白质丰度变化,检测范围0.1-1000 fmol/μL,精度CV≤10%。
磷酸化位点定量:分析磷酸化修饰水平,检测分辨率0.01 Da,定量误差±5%。
泛素化定量:评估泛素化修饰程度,灵敏度0.5 fmol,动态范围10⁴。
乙酰化定量:检测乙酰基团修饰,准确度±3%,最小检出量1 fmol。
蛋白质丰度差异分析:比较不同样本蛋白表达,fold-change检测下限1.5倍,p值<0.05。
肽段定量:基于肽段离子强度计算丰度,信噪比>30,定量精度RSD<8%。
蛋白质鉴定:确认蛋白质序列身份,序列覆盖率≥90%,错误发现率<1%。
蛋白质复合物分析:研究相互作用网络,结合常数Kd检测范围10⁻⁶-10⁻¹² M。
生物标志物筛选:识别疾病相关蛋白,特异性>95%,重现性CV<15%。
蛋白质稳定性测试:评估降解动力学,半衰期测定精度±5 min,温度范围4-37°C。
定量准确性校准:使用同位素内标验证,校准曲线R²>0.99,线性范围10³。
修饰位点定位:确定修饰氨基酸位置,定位精度±1残基,置信度>99%。
蛋白质组深度覆盖:分析低丰度蛋白,检出限0.01 fmol,覆盖蛋白数>10,000。
样本间归一化:校正批次效应,归一化因子误差±2%。
翻译后修饰谱:综合评估多修饰类型,同时检测>10种修饰,定量一致性ICC>0.9。
检测范围
生物组织样本:包括肿瘤、脑组织等冷冻或石蜡包埋样本,用于病理蛋白质组研究。
血清血浆样本:临床诊断中循环蛋白质标志物分析,适用于癌症筛查。
细胞裂解物:涵盖癌细胞系、原代细胞培养物,支持药物响应研究。
微生物样本:细菌、真菌及病毒裂解液,用于感染机制解析。
植物样本:作物叶片或种子提取物,应用于农业生物技术开发。
药物研发样本:药理模型中的组织或细胞样品,评估药效蛋白质变化。
疾病模型样本:动物模型如小鼠肝脏或脑组织,用于神经退行性疾病研究。
蛋白质纯化物:重组蛋白或抗体溶液,纯度验证及稳定性测试。
食品样本:乳制品或谷物提取物,检测过敏原或营养成分。
环境样本:水体或土壤微生物群落蛋白,用于生态毒理学评估。
体液样本:尿液或脑脊液,非侵入性生物标志物发现。
器官样本:心脏、肾脏等器官切片,器官特异性蛋白质表达分析。
干细胞样本:多能干细胞分化产物,再生医学相关蛋白鉴定。
生物制药中间体:疫苗或抗体生产过程中的中间品质量控制。
古生物样本:化石提取物,进化蛋白质组学研究。
检测标准
ISO 10993-18:2020 医疗器械生物评估 - 化学表征要求,涵盖蛋白质修饰分析。
ISO 17025:2017 检测实验室通用能力准则,确保数据可追溯性。
ISO 5725-2:1994 精度数据测量方法,用于定量重复性验证。
ASTM E685-93 液相色谱方法标准,规范肽段分离流程。
GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范,应用于食品蛋白质检测。
GB/T 33444-2016 生物样品中蛋白质定量方法,规定临床样本处理。
ISO 9001:2015 质量管理体系,支撑全过程标准化。
GB/T 37881-2019 高通量测序数据质量评价,适配蛋白质组数据分析。
ISO 15189:2012 医学实验室要求,针对诊断蛋白质组应用。
ASTM WK25130 质谱定量指南草案,涵盖DIA数据采集规范。
GB/T 34806-2017 蛋白质组学数据格式,统一结果报告标准。
ISO 21348:2007 空间环境太阳光谱测量,类比蛋白质光稳定性测试。
GB/T 7714-2015 参考文献著录规则,引用国际标准文献。
检测仪器
液相色谱仪:实现肽段高效分离,采用反相C18柱缩短运行时间至60 min。
高分辨率质谱仪:执行DIA模式数据采集,提供>120,000分辨率确保肽段定量精度。
自动化样品处理系统:完成蛋白质消化和纯化,减少人为误差,通量>96样本/批。
蛋白质消化设备:使用胰蛋白酶进行酶解,控制温度37±0.5°C提升消化效率。
生物信息学工作站:运行DIA数据分析软件,实现谱库匹配和定量计算。
冷冻离心机:处理生物样本沉淀,转速范围100-20,000 rpm维持蛋白稳定性。
纳米喷雾离子源:增强质谱离子化效率,提升低丰度蛋白检出率。
紫外可见分光光度计:测量样本蛋白浓度,精度±0.1 μg/μL确保输入均一。
数据存储服务器:管理原始谱图文件,支持PB级数据备份。
校准用参考物质发生器:产生同位素标记肽段,用于定量准确性验证。
检测服务范围
1、指标检测:按国标、行标及其他规范方法检测
2、仪器共享:按仪器规范或用户提供的规范检测
3、主成分分析:对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。
4,样品前处理:对产品进行预处理后,进行样品前处理,包括样品的采集与保存,样品的提取与分离,样品的鉴定以及样品的初步分析,通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;
5、深度分析:根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测,然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。

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